大鼠pEGFP-C3/BMP-2真核表达载体的构建(2)
1.2 方法1.2.1 BMP-2的提取 UCSC Genome Browser上查找大鼠BMP2基因在各种组织中的表达情况,选择从表达量较高的胃组织中抽提RNA,然后采用Trizol方法进行总RNA提取,经逆转录后采用,1%的琼脂糖凝胶电泳检测其纯度和完整性,然后PCR钓取BMP2基因。
1.2.2 BMP-2与pEGFP- C3酶切及目的片段回收 PCR产物(BMP2)经电泳后,在紫外条件下,手术刀切取含目的片段的凝胶条带。在无菌的0.2 mL EP管中分别配制双酶切体系(含XhoⅠ与 KpnⅠ),37℃酶切(pEGFP-C3或BMP2)3 h,纯化回收酶切产物(TIANgel Midi Purification Kit)。
1.2.3 pEGFP-C3/BMP2表达质粒载体构建 向0.2 mL EP管中加入以下试剂SolutionⅠ、BMP2(XhoⅠ/KpnⅠ)、pEGFP-C3(Xho Ⅰ/KpnⅠ)及DNA Ligation Kit 2.0进行基因片段与载体连接 ......
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