惠州客家人群食管癌EGFR蛋白表达及与MAPK信号通路相关性的初步研究(3)
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2.2 MAPK(ERK1/2)在惠州客家人群食管癌组织及癌旁正常组织中的表达
免疫组化显示，MAPK(ERK1/2)蛋白阳性免疫产物呈棕黄色，广泛分布于食管癌旁正常组织和食管癌细胞的胞浆内，少数可见核-浆表达。实验结果表明：不同分级、浸润深度及有无淋巴结转移患者食管癌组织中ERK1/2表达差异无统计学意义(P > 0.05)。(表1、2)。免疫组化及Western-blotting结果(图3)均显示：食管癌及癌旁正常组织均表达ERK1/2蛋白，图像分析和统计结果表明，ERK1/2在癌组织及癌旁正常组织中的表达差异无统计学意义(P > 0.05)。
2.3 p-ERK1/2在惠州客家人群食管癌及癌旁正常组织中的表达
免疫组化显示：对p-ERK1/2的检测表明：53例癌旁正常组织均呈p-ERK1/2阴性或弱阳性表达，阳性信号主要以基底细胞的胞核最强。53例食管癌组织中p-ERK1/2的表达显著高于癌旁正常组织(P < 0.01)，阳性信号位于癌细胞的细胞核(49例呈阳性，阳性率92.45%)(图4、5)。实验结果表明：①分化程度越低，p-ERK1/2表达越高，在Ⅰ～Ⅲ级食管鳞癌组织中，p-ERK1/2蛋白阳性率随组织恶性程度增高而逐渐升高；②有淋巴转移患者p-ERK1/2的表达明显高于无淋巴转移者(P < 0.01)。③浸润浅肌层患者p-ERK1/2表达的阳性率明显低于浸润深肌层患者(P < 0.05)(表1、2)。Western blot结果显示：癌组织强表达p- ERK1/2蛋白，相对于癌旁正常组织中的阴性或弱阳性表达有高度统计学意义(P < 0.01)。见图3。
3 讨论
EGFR/erbB1基因位于q7，为170～180 kDa的跨膜糖蛋白，由胞外配体结合区、跨膜区、胞内区(此区具有内在酪氨酸激酶活性)3部分组成。EGFR与其配体EGF等刺激信号结合后活化，启动其信号传导下游一系列的级联反应，引起核内基因转录水平增加，促进细胞的增殖分化。EGFR在肿瘤细胞中过表达或突变，导致细胞生长失控和恶性转化[4]。本实验结果显示：①癌旁正常食管黏膜上皮仅见正常食管上皮基底细胞和间质细胞有低水平染色(+/-)，基底层以上的上皮细胞均呈EGFR阴性表达。②食管癌组织中EGFR呈明显的过表达(阳性率为69.81%)，阳性表达信号主要位于癌细胞的胞膜和胞浆。在惠州客家人群食管癌组织中EGFR蛋白存在过表达，癌组织分化程度及有无淋巴结转移对其有影响，而癌浸润深度对其无影响。可能原因是存在着转录后调控或蛋白质修饰的异常，或存在个体差异、地域性的食管癌组织可能存在表达差异，这种差异有待于进一步进行流行病学及分子生物学的研究来证实。
Raf→MEK(MAPkinase)→MAPK/ERK信号级联是转导细胞内信号的最重要通路。ERKs使细胞外接信号传递到细胞核内而调节基因表达等多种过程。研究表明，ERK在很多恶性上皮肿瘤中存在过度激活[5]。Iwase等[6]发现p-ERK在鼠胚胎胃组织中及人类胃癌组织中呈高表达，表明p-ERK可促进胃黏膜细胞的增殖及恶性转化。Gu等[7]报道胃癌p-ERK蛋白表达明显高于正常胃黏膜，并且p-ERK蛋白过表达与肿瘤浸润深度，有无淋巴结转移及临床分期有关。本研究结果显示：ERK1、ERK2蛋白表达水平在食管鳞癌组织与癌旁正常黏膜组织无差异(P > 0.05)，而p-ERK1、p-ERK2的表达水平却显著增高(P < 0.01)，表明在惠州客家人群食管癌的发生发展过程中ERK1/2蛋白被磷酸化活化为p-ERK而发挥作用。可见，ERK1/2在正常情况下以非活性形式存在，被磷酸化活化为p-ERK后，在食管鳞癌发生、发展等信号转导途径中起重要作用。
Leu等[8]研究发现，表皮生长因子(epidermal growth fator，EGF)通过激活ERK1/2，上调凋亡抑制基因mcl-1表达而抑制食管癌细胞凋亡，说明ERK1/2过度活化与食管癌细胞增殖有关。持续活化的ERK1/2(P-ERK1/2)可激活周期调控基因CyclinD1和核转录因子c-myc，促使细胞由G1期向S期转化，进而诱导细胞增殖[9]。因此，在食管癌发生发展过程中，可能由于致癌因子或癌基因产物刺激，建立EGF/EGFR自分泌系统，使EGFR蛋白过表达，ERK1/2持续活化，而导致Ras/Raf/MEK/EKR信号通路的异常激活，细胞在转录水平增殖失控、凋亡受阻，使细胞发生恶性转化，并促进肿瘤的浸润和转移。可见，在食管癌进展中EGFR/ERK信号级联可能是食管癌的重要分子机制。但是，Barry等[10]研究发现在人食管胃恶性肿瘤转移的肋骨骨髓细胞系p-ERK1/2显著增多， MEK抑制剂PD98059和U0126不能阻滞ERK1/2活化，因而指出ERK1/2活化可能还有非Raf→MEK→MAPK/ERK机制，说明细胞内信号的转导是复杂和多样的，与肿瘤细胞增殖有关的ERK1/2活化是细胞内多条信号通路的汇聚点。
可见，ERK活化后从胞浆进入胞核是MAPK相关通路活化的重要组成部分 ......
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