泰国缺失型α-地中海贫血1导致血红蛋白H病的产前诊断(2)
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参见附件。
目前常规α-地贫基因诊断只包括常见的6种基因类型，即3种缺失型[东南亚缺失型(--SEA/)、右侧缺失型(-α3.7/)、 左侧缺失型(-α4.2/)]和3种点突变[Hb constant spring(Hb CS)、Hb Westmead (Hb WS)和Hb Quong Sze(Hb QS)]。泰国缺失型由于罕见而不在常规检测范围，因而造成漏诊，导致泰国缺失型的Hb H病和泰国缺失型的巴氏水肿胎儿出生。如何避免泰国缺失型漏诊，本研究笔者对发现3对有可能生育泰国缺失型Hb H病胎儿的夫妇，采用两步骤的检测方法成功进行了产前诊断，现报道如下，以期为相关研究提供科学依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料
2010年6月～2011年12月在广西妇幼保健院优生遗传门诊就诊的夫妇中发现3对可能生育泰国缺失型Hb H病胎儿，知情同意后，对其进行地贫产前诊断。
1.2 取材
外周血样本：抽取静脉血2 mL，EDTA抗凝，取200 μL提取DNA。羊水样本：按常规抽取10 mL， 3500 r/min离心10 min，弃上清液，取沉淀提取DNA。脐血样本：按常规抽取1 mL，EDTA抗凝后，取其中200 μL用于提取DNA。外周血和脐带血样本同时进行血常规和血红蛋白检测。血常规检测采用全自动血液分析仪(迈瑞公司BC-5800)。血红蛋白检测采用凝胶血红蛋白电泳(全自动电泳仪，法国Sebia公司)，按说明操作。
1.3 DNA提取
按微量DNA提取试剂盒(德国QIAGEN公司)说明提取。
1.4 6种常见α-地贫基因型检测
每份样本首先进行6种常见α-地贫基因型检测。(--SEA/)、(-α3.7/)和(-α4.2/)检测采用跨越断裂点PCR(gap-PCR)方法；Hb CS、Hb WS和Hb QS检测采用等位基因特异性寡核甘酸探针反向斑点杂交方法(RDB)进行 (α-地贫检测试剂盒，深圳创益生物有限公司)，操作均按说明进行。
1.5 泰国缺失型检测
每份样本取2 μL DNA，采用gap-PCR方法进行检测，引物见参考文献[7]，预期扩增产物片段大小约为1 000 bp。50 μL反应体系包括：10×缓冲液、2 mmol/L dNTPs、Tap DNA 聚合酶0.5 μL (大连宝生物)、10 nmol/L引物，DNA 1μg；反应条件：预变性96℃ 5 min，98℃ 45 s，61℃ 90 s，72℃ 135 s，循环35次，72℃ 5 min；在PCR仪(ABI，9700)上反应结束后，取10 μL在1%琼脂糖凝胶上电泳50 min，Y啶橙核酸染料染色，凝胶成像系统(美国Bio-Rad，DOC-XR)上观察，并照相保存。
2 结果
2.1 家系1
2.1.1 妻子36岁，广西平果人，壮族，血常规和血红蛋白电泳未见异常；常见α-地贫6种基因型检测结果为右侧缺失型杂合子，泰国缺失型检测结果为未检出泰国缺失型。将两者结合分析，基因型是(-α3.7/αα)。
2.1.2 丈夫37岁，广西平果人，壮族，无贫血外貌，肝脾肿大不明显，血常规结果：平均红细胞体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白量(MCH)下降，提示小细胞低色素贫血；血红蛋白电泳Hb A2 2.0%，Hb H 5%；常见α-地贫6种基因型检测结果为左侧缺失型纯合子，泰国缺失型检测结果为检出泰国缺失型。将两者结合分析，丈夫实际为泰国缺失型复合左侧缺失型双重杂合子，基因型是(--THAI/-α4.2)。
2.1.3 胎儿胎龄22周，系统B超未见异常，脐血血常规结果为：血红蛋白93 g/L，MCV 87.5 fl，MCH 26.5 pg，均较正常下降；脐血血红蛋白分析结果为检出Hb bart's带，含量21.4%，提示胎儿为Hb H病；常见α地贫6种基因型检测结果为右侧缺失型纯合子；泰国缺失型检测结果为检出泰国缺失型。将两者结合分析，胎儿实际地贫基因为泰国缺失型复合右侧缺失型双重杂合子，基因型是(--THAI/-α3.7)。家系1的血常规、血红蛋白电泳和基因分析结果详见表1。
2.2 家系2
2.2.1 妻子36岁，广西钦州人，汉族，血常规和血红蛋白电泳未见异常；常见α地贫6种基因型检测结果为左侧缺失型杂合子；泰国缺失型检测结果为未检出泰国缺失型。将两者结合分析，基因型是(-α4.2/αα)。
2.2.2 丈夫45岁，广西大化人，壮族，血常规结果：MCV、MCH下降，提示小细胞低色素贫血；血红蛋白电泳Hb A2 2.8%；常见α-地贫6种基因型检测结果为6种基因型检测均未检出；泰国缺失型检测结果为检出泰国缺失型。将两者结合分析，丈夫实际为泰国缺失型杂合子，基因型是(--THAI/αα)。
2.2.3 胎儿现在孕16周，B超未见异常；常见α-地贫6种基因型检测结果为左侧缺失型纯合子；泰国缺失型检测结果为检出泰国缺失型。将两者结合分析，胎儿实际地贫基因为泰国缺失型复合左侧缺失型双重杂合子，基因型是(--THAI/-α4 ......
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