高能聚焦电流场对u14宫颈癌荷瘤小鼠的治疗实验研究(1)
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[摘要] 目的 观察高能聚焦电流场对u14小鼠宫颈癌杀伤作用以及对荷瘤小鼠生存转归状况的影响。 方法 取64只雌性ICR小鼠，制备u14宫颈癌皮下移植瘤模型。对治疗前后组织进行形态学观察、肿瘤体积变化曲线及小鼠体重变化分析，同时对照观察两组生存期和肿瘤转归状况，探讨高能聚焦电流场治疗肿瘤的有效性和安全性。 结果 组织学、术后肿瘤体积变化曲线及手术前后小鼠体重变化证实：高能聚焦电流场可直接杀死肿瘤细胞；组织形态学观察发现，肿瘤细胞变性坏死等征象，随时间推移坏死愈加明显。两组荷瘤小鼠术后31 d肿瘤转归状况：治疗组完全应答(CR)占69.56%。对照组全部为进展性疾病，死亡率为39.13%，两组差异有统计学意义(P < 0.05)。生存期分析表明两组差异有高度统计学意义(P < 0.01)。 结论 高能聚焦电流场对u14小鼠宫颈癌细胞具有杀灭作用，可延长荷瘤小鼠的生存期。
[关键词] 高能聚焦电流场；混频电流场；宫颈癌；u14
[中图分类号] R737.33 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)10(a)-0014-04
高能聚焦电流场不同于传统的消融技术，临床上用于治疗宫颈炎、宫颈糜烂，但是其应用于宫颈癌以及其他肿瘤的治疗尚未见报道。为了了解高能聚焦电流场消融技术对宫颈癌的治疗作用，笔者采用高能聚焦电流场治疗仪直接作用于u14宫颈癌荷瘤小鼠，探讨其治疗宫颈癌的有效性和安全性。
1 材料与方法
1.1 高能聚焦电流场治疗仪
妇科消融仪(型号：AIRE3000，华年电子公司提供)利用混频电流场原理对蛋白质变性进行处理，以达到治疗的目的。该仪器能够实时温度控制与显示，最高治疗温度为70℃，最长治疗时间为100 min，其治疗电极(型号：Aire-1014，柱状)直径为4 mm。
1.2 动物模型分组及治疗
雌性ICR小鼠64只，鼠龄5～6周，重量15～18 g(清华大学实验动物中心提供)。传代腹水型ICR小鼠u14小鼠宫颈癌瘤株(中国科学院药物研究所提供)用无菌生理盐水稀释至1×107个/mL，于小鼠右后肢外侧行皮下接种0.2 mL，常温饲养。待肿瘤最大直径达0.9～1.0 cm时(游标卡尺测量)，采用随机数字法随机将其分为治疗组和对照组，每组各32只。将各组小鼠采用1%戊巴比妥钠腹腔注射(2.5～3.0 mg/100 g)麻醉备皮后固定在治疗板上，充分暴露肿瘤组织。将高能聚焦电流场治疗仪的治疗电极放置并固定在肿瘤组织上。治疗组治疗条件设定为固定输出温度69℃，功率6 W，治疗电极作用于肿瘤组织(90±2)s。对照组仪器不做任何条件设定，将治疗电极放置肿瘤组织，行假手术。高能聚焦电流场消融技术术后两组小鼠同等条件下饲养。
1.3 形态学观察
术前(对照组)及术后(治疗组)即刻、第9天、第18天时间点处死3只小鼠，取瘤组织置10%中性甲醛中固定，行常规石蜡包埋、切片，HE染色后光镜下观察。对照组和治疗组术后即刻的瘤组织切取1 mm×1 mm×1 mm，戊二醛、锇酸固定，脱水，环氧树脂包埋，超薄切片，铀/铅染色，应用FEI Quanta 200型透射电镜观察其超微结构。
1.4 实验小鼠体重变化
术前及术后第35天称两组荷瘤鼠体重，计算平均值。
1.5 生存转归观察
术后第31天测量两组小鼠肿瘤体积(V)(单位：cm3)。瘤体V=1/2ab2(a：最长径，b：最短径)。采WHO肿瘤应答评估规则评价[1-2]：①完全应答(CR)，指治疗至少30 d后未触及或测量的瘤体，皮肤完整性恢复；②部分应答(PR)，指瘤体积减少> 50%；③稳定性疾病(SD)，指瘤体积减少< 50%；④进展性疾病(PD)，指瘤体积继续增加。
1.6 生存期观察
相同条件饲养两组小鼠，顺其自然生存，记录小鼠生存或死亡时间(以d为单位)，并绘制荷瘤小鼠生存曲线。
1.7 统计学方法
采SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示，两组间比较采用t检验；生存期资料进行Log-rank检验，并用Kaplan-Meier方法绘制生存曲线。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 肉眼观察
对照组肿瘤组织，肉眼观察呈类球形，质韧，灰红色，表面血管丰富，与邻近组织连接紧密，剥离困难，直径约1 cm，剖面呈鱼肉状，中心无明显的出血坏死。治疗组术中，治疗电极作用处表皮无出血，术后立刻剖开肿瘤，质软，灰白色，有液化区域。术后第9天及第18天，治疗电极作用处表面结痂，切面有瘀血坏死区，质硬。随时间推移，部分焦痂脱落，皮肤完整性恢复，皮下未见瘤体。见图1。
2.2 光镜观察
肿瘤接种后7 d，对照组肿瘤细胞呈条索及团块状生长，呈多边形或不规则形，细胞核大，核膜厚，染色质粗，可见核分裂相，胞浆少，呈轻度嗜碱。对照组肿瘤接种后16、25 d与接种后7 d形态相似。治疗组在术后即刻切除的样本中发现，治疗部位的表皮组织形态与正常表皮组织形态有明显差异；光镜下观察发现，大部分肿瘤细胞结构尚完整，部分肿瘤细胞核结构疏松，少数肿瘤细胞有核固缩，肿瘤细胞有坏死；术后第9天发现 ......
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