五甲基槲皮素对行颈静脉移植的心肌重构大鼠的治疗作用(1)
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[摘要] 目的 研究五甲基槲皮素(PMQ)对行自体颈静脉移植的心肌重构大鼠模型的治疗作用。 方法 30只SD大鼠随机分为模型组、溶剂组和治疗组，建立大鼠颈部自体静脉移植模型后，每晨分别给予生理盐水、溶剂和25 mg/kg PMQ灌胃，均于第15天开始皮下注射血管紧张素Ⅱ[Ang Ⅱ，288 μg/(kg·d)]，于21 d后取材。测量心脏指数、左心指数，测量心肌羟脯氨酸含量，免疫组化测量胶原Ⅰ、Ⅲ容积分数(CVF)比值CVFⅠ/Ⅲ；测量新生内膜和中膜的厚度比及面积比。 结果 PMQ能显著抑制心肌的肥厚及纤维化，并能抑制移植静脉内膜的增生，而溶剂则无此作用。 结论 PMQ对心肌重构及移植静脉内膜增生均有改善作用，有潜力成为冠状动脉旁路移植术(CABG)术后的治疗药物。
[关键词] 五甲基槲皮素；心肌重构；内膜增生
[中图分类号] R739.63 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)10(c)-0013-03
槲皮素是黄酮类化合物的一种，有广泛的药理学作用，如抗氧化、抗高血压、抗缺血再灌注损伤、抗肿瘤等[1-2]。但天然的黄酮类化合物不易于提取、制备和保存，加之其生物利用度低，半衰期短，效价低，均妨碍了其研发和利用。这些特点是由于其含有多个羟基。而用多甲基替代多羟基结构会使黄酮类化合物具有明显的药代动力学特点和药效动力学优势。但目前天然多甲氧基黄酮由于提取工困难，其使得量少、价格贵，研究仅限于细胞水平而难以进行体内药理学研究。五甲基槲皮素(Pentamethylquercetin，PMQ)是对槲皮素进行了甲基化改造而获得。由于工艺的改进，获得了高纯度、低价位的PMQ，得以体内研究PMQ的药理学特性。
笔者之前的研究发现PMQ除有较强的抗氧化作用外，还有对抗心肌肥厚、纤维化及静脉内膜增生的作用[3-4]，但考虑到临床上两者多相伴随，如接受冠状动脉旁路移植术(CABG)或支架植入术(PTCA)的冠心病患者多伴有慢性充血性心力衰竭和心肌重构，这些患者术后仍将面临心肌肥厚、纤维化、心力衰竭和静脉桥管再狭窄的问题，故本研究尝试探索PMQ对这类患者是否有益。本实验通过制作大鼠颈部静脉移植模型并用血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导心肌重构模拟接受搭桥术的冠心病患者的体内情况，通过口服PMQ干预，研究其是否有治疗作用。
1 材料与方法
1.1 实验动物
SPF级健康雄性SD大鼠30只(体重250～300 g，同济医学院实验动物学部)，正常喂养。所有大鼠均建立颈部自体静脉移植模型，并均于第15天开始皮下注射Ang Ⅱ[288 μg/(kg·d)，分5次颈项部皮下缓慢注射][5]，于21 d后取材。
1.2 模型建立
所有手术均由同一人操作完成，所用显微镜是Carl Zeiss单人双目手术显微镜(德国蔡司光学仪器公司)，所用显微外科手术器械购自上海手术机械厂。
10%水合氯醛腹腔注射麻醉(3 mL/kg)后，1%肝素1 mL/kg腹腔注射肝素化。颈部备皮，纵行切口，无损伤游离颈外静脉，用9-0无损伤Polypropylene缝线(上海医用缝合针厂)行颈外静脉与颈总动脉的端端间断吻合。如静脉移植血管充盈、红润、随动脉一起搏动良好，则说明血管通畅，将血管复位，消毒后关闭切口。
1.3 分组及取材
动物被平均随机分为三组：模型组、溶剂组、治疗组。分别每晨给予生理盐水(5 mL/kg)、溶剂[二甲亚砜(DMSO)和5%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)溶剂按1∶9配制，5 mL/kg]和25 mg/kg PMQ灌胃(DMSO为溶剂配制5%PMQ母液，每次给药前按PMQ母液和5%PVP溶液1∶9比例制成0.5%的PMQ黄白色乳剂，按5 mL/kg即25 mg/kg灌胃)。于第22天麻醉后于原颈部切口处剪开皮肤，游离移植静脉及两端足够长的颈动脉。迅速开胸，取出心脏称重。将移植静脉及左室中段于4%多聚甲醛中固定，其余心肌组织液氮冻存待测。石蜡包埋，连续切片(厚5 μm)，取3张切片行HE染色。
1.4 心肌肥厚指标测定
剪除心房和大动脉，吸干，用分析天平称量心脏(HW)及左心室(LW)重量，除以体质量(BW)，得心脏指数(HW/BW)及左心指数(LW/BW)。
1.5 心肌纤维化指标测定
羟脯氨酸含量用氯胺T法检测(南京建成公司)。胶原容积分数(CVF)Ⅰ/Ⅲ用免疫组化染色后用图像分析系统(Image-Pro Plus 5.0)测定。每张切片随机选6个视野(不含血管周围胶原)，计算每个视野Ⅰ、Ⅲ型胶原阳性部分占视野面积百分比，取其均数即为CVF。
1.6 新生内膜增生测定
每张切片随机4个点，用图像分析系统(Image-Pro Plus 5.0)测量内膜(I)与中膜(M)的厚度、面积比。
1.7 统计学方法
采用统计软件SPSS 13 ......
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