复方补骨脂颗粒长期毒性研究
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[摘要] 目的 研究复方补骨脂颗粒经口服给药途径的长期毒性。 方法 以临床成人日用量的60、30、15倍连续灌服3个月，停药2周，分别称量大鼠体重，计算脏器系数，测定血液学和血液生化学指标，并做病理组织学检查。 结果 复方补骨脂颗粒三组剂量大鼠均未出现中毒症状，大鼠体质量、摄食、血液学、血液生化学和病理组织学等均未见毒理学意义的异常改变。 结论 复方补骨脂颗粒口服长期服用对大鼠无明显毒性反应，其无毒反应剂量为16 g/(kg·d)，可推荐临床使用。
[关键词] 复方补骨脂颗粒；大鼠；长期毒性
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2012)12(c)-0025-03
复方补骨脂颗粒为治疗骨质疏松的临床经验方，由补骨脂、知母、核桃仁、黄柏、延胡索、怀牛膝、砂仁、薏苡仁组成并对其合成工艺、质量标准、药效学等方面进行了较为系统的研究[1-3]。经临床验证，其具有良好的治疗骨质疏松的作用。复方补骨脂颗粒的主要给药方式是口服，为进一步了解复方补骨脂颗粒临床长期用药的安全性，参照《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》的相关规定[4]，进行长期毒性试验。长期毒性试验可以观察连续反复给药时，实验动物出现的毒性作用、剂量与毒性效应的关系、主要毒性靶器官、毒性反应的性质和程度、毒性反应是否可逆等，是临床前毒性评价的主要内容，是新药审评重点内容之一，它为临床安全用药的剂量设计提供参考依据，为临床毒副作用的监护及生理生化指标检测提供依据[5]。本实验以大鼠为对象，观察大鼠首先出现的症状和严重程度、毒性反应的靶器官及其恢复和发展情况，确定无毒剂量，为拟定人用安全剂量提供实验依据。
1 材料与方法
1.1 药物
复方补骨脂颗粒，由本实验组将补骨脂等八种中草药经煎制浓缩调制而成，批号：060215。
1.2 动物
SD大鼠(二级)，雌雄各半，体重90～100 g，由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK(冀)2003-1-003。
1.3 试剂
丙氨酸氨基转换酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转换酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、碱性磷酸酶(ALP)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(CHO)、总胆红素(BIL)、血糖(GLU)检测试剂分别由南京建成生物工程研究所，首都医科大学首医临床医学科技中心、保定长城临床试剂公司提供。
1.4 试验方法[6]
将大鼠随机分成4组，每组20只，雌雄各半，每笼饲养5只，分别为正常对照组，复方补骨脂颗粒小剂量组(4 g/kg，相当于临床用药的15倍)，复方补骨脂颗粒中剂量组(8 g/kg，相当于临床用药的30倍，)复方补骨脂颗粒大剂量组(16 g/kg，相当于临床用药的60倍)。大剂量组大鼠于每日上午8点、下午4点灌胃给予浓度0.8 g/mL的受试物，中剂量组大鼠于每日上午8点、灌胃给予浓度0.8 g/mL的受试物，下午4点灌胃给予等容量蒸馏水，小剂量组大鼠于每日上午8点灌胃给予浓度0.4 g/mL的受试物，下午4点灌胃给予等容量蒸馏水；对照组大鼠于每日上午8点灌胃给予等容量蒸馏水，容量均为1 mL/100g体重，每周定时给药7 d，并称重1次，根据体重变化调整给药量，连续3个月。末次给药后，动物禁食12 h(不禁水)，各组活杀10只大鼠，剩余10只大鼠作恢复期观察。试验周期为3个月；恢复期为2周。
1.5 检测指标
从购入日到恢复期结束，每天2次观察动物的外观体征、行为活动、二便情况；给药期间以及恢复期每周称1次体质量，测1次进水进食量；给药结束和恢复期结束各检测1次血液学及血液生化学，各组分别取一半动物的主要脏器进行肉眼观察、病理检查并计算脏器系数[7-8]。
1.6 统计学方法
采用SPSS 14.0进行统计学分析，计量资料数据以均数±标准差(x±s)表示，采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 一般状况
各组大鼠在整个试验期内，各组动物的外观、毛色、行为、体征、四肢活动及粪便尿液性状均属正常，并无一死亡。
2.2 对大鼠体重的影响
结果显示，各组大鼠体重增长差异无统计学意义(P > 0.05)；复方补骨脂颗粒(4、8、16 g/kg)连续12周灌胃给药对大鼠体重均无明显影响(P > 0.05)。见表1、2。
2.3 对大鼠血液学指标的影响
结果显示，各组大鼠外周血红细胞数、血红蛋白、血小板数、白细胞数及分类、凝血时间差异均无统计学意义(P > 0.05)，说明三个剂量组对大鼠的各项血液学指标均无明显影响。见表3。
2.5 对大鼠主要脏器系数的影响
结果显示，各组大鼠脏器系数差异均无统计学意义(P > 0.05)。表明，复方补骨脂颗粒三个剂量组对大鼠的各主要脏器系数均无明显影响。见表5。
2.6 病理组织学检查
随机抽取各组1/2动物对其重要脏器进行病理组织学检查，对心、肝、脾、肾、肺、大脑胃、胸腺、肾上腺、甲状腺、卵巢、子宫、睾丸、前列腺等的病理组织学检查，结果各给药组和对照组均未发现与用药有关的病理组织学的改变。
3 讨论
复方补骨脂颗粒是由补骨脂、知母、核桃仁、黄柏、延胡索、怀牛膝、砂仁、薏苡仁八味中药组成的复方制剂，其中补骨脂是君药，含有多种活性成分，香豆素类是其主要活性成分，其中的补骨脂素亦有毒性方面的报道[9-10]。对复方补骨脂颗粒进行了3个月的大鼠长期毒性试验，通过该受试药对大鼠毒理实验性的研究，为其在临床长期使用的安全性，拟定临床试验剂量及观察指标提供参考。实验研究主要从一般检查(摄食、体质量、活动、二便等)、血液学检查、血液生化学检查、主要脏器质量及计算脏器系数、主要脏器病理形态5个方面评价复方补骨脂颗粒，设计高中低三个给药组，用药量分别达到临床用量的60、30、15倍，整个实验周期无一动物死亡。在所检测的各项指标中：①各组动物摄食正常，未出现与给药浓度相对应的差异变化趋势，停药后，各组动物摄食量未见延迟性变化。②对动物体质量无影响，受试物各组与正常对照组体质量增长相近。③血液学检查表明高、中、低剂量组间无剂量依赖关系。④血液生化学检查表明，低、中、高剂量组均在正常参考值范围之内，且无剂量性依赖关系，可以认为该受试物给药后对各项血液生化指标没有影响。⑤病理组织学检查表明，受试物各组脏器质量及脏器系数均在正常范围内波动。综上所述，表明该药物无明显毒性反应，其无毒反应剂量为16 g/(kg·d)，可推荐临床使用。
[参考文献]
[1] 张茹，陈军丽.正交试验优选复方补骨脂颗粒的提取工艺[J].中国医院药学杂志，2009，29(3)：252-253.
[2] 张茹.复方补骨脂颗粒质量标准研究[J].现代中西医结合杂志，2010，19(25)：3226-3228.
[3] 张茹 ......
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