对甲基桂皮丹酚酯的合成及抗辐射活性研究(1)
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[摘要] 目的 研究对甲基桂皮丹酚酯(4a)的合成方法及其抗辐射活性。 方法 通过制备酰氯的方法，在碱性条件下与丹皮酚进行酯化得到目标产物，并确证结构。以6～8周龄ICR小鼠为研究对象，经γ-射线一次性全身照射后，以30 d存活率及保护指数、平均存活天数，以及相关脏器系数、白细胞(WBC)、血小板(PLT)为指标，考察目标化合物4a低、中、高3个剂量的抗辐射损伤效应。 结果 小鼠经137Cs γ-射线8.5 Gy一次性全身照射后，4a低、中、高剂量组的存活率由空白对照组的14.29%分别提高到28.57%、42.86%、35.71%，阳性对照组为28.57%，平均存活天数明显延长，与空白对照组比较，差异均有高度统计学意义(均P < 0.01)，尤其是中剂量组，和阳性对照组比较差异有统计学意义(P < 0.05)。保护指数分别为1.50、2.01、1.60，阳性对照组为1.48，各组间比较，差异无统计学意义(P > 0.05)；对受6.5 Gy γ-射线全身照射后辐射损伤ICR小鼠生理指标影响的检测，结果显示4a在不同程度上增加PLT和DNA含量及胸腺系数、脾系数。 结论 本研究表明对甲基桂皮丹酚酯化合物具有一定的抗辐射损伤作用。
[关键词] 对甲基桂皮酸；丹皮酚；衍生物；辐射防护；功效研究
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)01(a)-0020-03
辐射损伤一直为国内外学者关注的焦点问题。辐射防护剂一方面预防以减轻辐射对机体造成损伤的程度，另一方面是对损伤后放射病的有效治疗。早期曾有报道，桂皮酸的衍生物具有增强巨噬细胞吞噬活性和激活细胞免疫的作用，以及桂皮酸衍生物具有抗辐射和清除自由基的活性[1-3]。文献调研表明，天然酚类成分——丹皮酚具有明显的抗自由基活性[4-5]。丹皮酚还具有免疫增强活性，能明显增强中性粒细胞对体外金黄色葡萄球菌的吞噬功能。研究观察了丹皮酚雾化吸入对大鼠免疫功能的影响，结果显示试验组大鼠肺巨噬细胞吞噬率比对照组明显增高[6]。应康等[7]研究了丹皮酚对小鼠淋巴细胞转化的影响，结果表明丹皮酚雾化吸入可提高大鼠肺局部非特异性免疫功。本文通过化学拼合原理，合成筛选出了对甲基桂皮丹酚酯(4a)衍生物，并对其进行了初步的抗辐射活性研究，结果显示该化合物具有一定的抗辐射损伤作用。现报道如下：
1 材料与方法
1.1 试药
将本室自行合成的对甲基桂皮丹皮酚酯，纯度98%以上(HPLC分析结果)，研细后用5‰CMC-Na溶液研细并配成浓度为2.5、5.0、7.5 mg/mL(低、中、高3个浓度)的混悬液。
1.2 动物与仪器
ICR小鼠，6～8周龄，雌雄共100只，20～22 g，由中国医学科学院实验动物研究所提供。荧光显微镜，铯137(137Cs)γ-射线辐射源(加拿大原子能有限公司)。
1.3 对甲基桂皮酸酰氯的合成
100 mL圆口烧瓶加入3.2 g(0.02 mol)对甲基桂皮酸按参考文献[8]制备对甲基桂皮酰氯，减压蒸馏除去过量的二氯甲烷和SOCl2，石油醚重结晶得白色固体3.32 g，产率91%，熔点37～39℃。
1.4 对甲基桂皮丹酚酯的合成
称取1.66 g(0.01 mol)丹皮酚于100 mL圆口烧瓶中，加入20 mL二氯甲烷溶解，滴加1 mL三乙胺，冰水浴磁力搅拌条件下，缓慢滴加上述合成的对甲基桂皮酰氯2.5 g(0.014 mol)的10 mL二氯甲烷溶液，加毕继续反应2 h，旋转蒸发仪蒸除二氯甲烷得乳白色黏稠状物，石油醚重结晶得白色固体，饱和碳酸氢钠、蒸馏水洗，最终得白色固体2.81 g，产率88.9%，熔点89～92℃。其合成路线见图1。
1.5 实验方法
1.5.1 30 d存活率实验 ICR小鼠60只，雌雄各半，按体重随机分成5组，14只/组，分别为高(150 mg/kg)、中(100 mg/kg)、低(50 mg/kg)3个浓度给药组、空白对照组(5‰CMC-Na)、阳性对照组(茜草双酯，500 mg/kg)。各组均在照射前3，2，1 d连续3次口服灌胃给药，0.1 mL/10 g，137Cs γ-射线8.5 Gy一次性全身照射，并每天观察记录小鼠的存活情况。
1.5.2 体内抗辐射活性实验 ICR雄性小鼠40只，按体重随机分5组，8只/组，设有空白对照组、阳性对照组(炔雌醇)以及4a高(150 mg/kg)、中(100 mg/kg)、低(50 mg/kg)3个剂量组。给药方式同上述，经137Cs进行6.5 Gy γ-射线一次性全身照射。
1.6 观察指标
1.6.1 存活率、保护指数、小鼠平均生存天数 计算小鼠30 d存活率、保护指数、小鼠平均生存天数，计算方法依据参考文献[9]。
1.6.2 白细胞数(WBC)、血小板数(PLT) 照射后第8天称重后眼眶静脉取血 ......
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