尼美舒利对人宫颈癌Hela细胞株的抑制作用及其机制研究(2)
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100～800 μmol/L尼美舒利作用Hela细胞24、48和72 h后，可显著抑制细胞的生长，见图1。对照组(0 μmol/L组)宫颈癌Hela细胞抑制率在观察期内始终处于本底水平，而浓度为100、200、400和800 μmol/L的尼美舒利作用24～72 h后Hela细胞抑制率显著升高，药物作用浓度、作用时间与细胞抑制率之间呈现明显的剂量-效应和时间-效应关系。
2.2 尼美舒利对Hela细胞显微及超微结构的影响
2.2.1 显微结构改变 见图2。对照组Hela细胞呈梭形或多角形，单层生长良好，数量多，胞间接触紧密(图A)。而经400 μmol/L尼美舒利处理的Hela细胞，数量明显减少，细胞膜鼓起，体积缩小，细胞固缩，胞间隙增大，附壁能力显著下降，呈悬浮状，胞浆透亮度下降，呈颗粒感(图B)。200 μmol/L尼美舒利处理组细胞改变较400 μmol/L组轻，只有部分脱壁固缩(图C)。
A：对照组；B：400 μmol/L尼美舒利组； C：200 μmol/L尼美舒利组
2.2.2 超微结构改变 对照组细胞表面微绒毛丰富，胞浆均匀，较多细胞器分布，空泡少，细胞核大且染色质呈均匀斑点状分布，胞质中糖原颗粒及线粒体较多见。400 μmol/L尼美舒利作用后，细胞表层微绒毛减少，核呈不规则状，核内染色质凝集成块，可见凋亡小体，个别细胞呈空化状，线粒体肿胀，嵴断裂，少数细胞膜破坏，细胞器溢出。见图3。
2.3 尼美舒利对Hela细胞COX-2表达的影响
为了探讨尼美舒利的抑制肿瘤细胞的机制，笔者研究了COX-2蛋白的表达变化，见图4。由图4可知，COX-2在尼美舒利作用24、48和72 h后，表达水平与空白对照组相比均显著下降(P < 0.05、P < 0.01)，且其变化趋势与作用时间均呈现明显的时间-效应关系。
2.4 尼美舒利对Hela细胞Caspase-3的表达的影响
为了进一步探讨尼美舒利的抗肿瘤机制，笔者研究了细胞凋亡通路关键蛋白Caspase-3的表达变化。尼美舒利对Hela细胞Caspase-3的表达的影响结果见图5。由图5可知，Hela细胞在药物作用24、48和72 h后，Caspase-3的表达水平与空白对照组相比分别上升了约1.2、1.5和2.5倍(P < 0.01)。
3 讨论
尼美舒利是一种新型的非甾体类抗炎药，对COX-2的抑制具有高选择性，长期服用无明显肾或胃肠道副作用。大样本人群的回顾性研究表明，绝经妇女定期服用非甾体抗炎药5～9年和10年以上，乳腺癌发生率分别下降21%和28%[8]，也有研究认为，服用非甾体抗炎药与降低女性癌变的发生风险之间并无统计学上的联系[9]。基于此，探讨非甾体抗炎药抗癌的机制具有重要意义。
本实验通过观察尼美舒利对人宫颈癌Hela细胞株的抑制作用，探讨了其对人宫颈癌细胞抑制作用以及相关机制。MTT检测结果及细胞纤维形态学改变均表明，尼美舒利可显著抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖，超微结构中可见凋亡小体及细胞器损伤，这表明尼美舒利可诱发肿瘤细胞的凋亡或坏死。
COX-2可通过前列腺素参与调控癌细胞生长与分化，同时，COX-2可抑制细胞凋亡[10]。尼美舒利抑癌机制可能与抑制COX-2的活性，进而促发癌细胞凋亡的发生有关。研究表明，尼美舒利还可通过减少慢性炎症中超氧化物、8-羟基-脱氧鸟苷酸的产生，促进细胞的凋亡[11]。本研究结果显示，尼美舒利作用后，COX-2表达水平显著降低，这可能在一定程度上促进了肿瘤细胞的凋亡。
细胞凋亡在肿瘤的发生、发展过程中具有重要的生物学意义，很多化疗药物都是通过诱导癌细胞的凋亡进而发挥抑制肿瘤的作用[12]。细胞凋亡是由Caspase家族介导的蛋白酶级联反应过程，不同的细胞或不同信号转导途径诱发的凋亡过程参与的Caspase也不尽相同，而Caspase-3是凋亡的关键酶和执行者，是所有细胞凋亡蛋白酶级联反应的“公共通路”，被称为“死亡蛋白”。本研究的结果表明，尼美舒利可以诱发Hela肿瘤细胞中凋亡关键蛋白Caspase-3的表达水平显著升高，且药物作用时间与Caspase-3表达水平之间均呈现明显的时间-效应关系。
综上所述，尼美舒利具有明确的抑制宫颈癌Hela细胞的作用，其机制之一可能是通过抑制COX-2表达引发肿瘤细胞的凋亡。尼美舒利是一种具有临床应用价值的抗宫颈癌药物，对其作用机制和在体抗肿瘤活性作用仍需深入探索。该研究对拓展抗宫颈癌药物研究思路、寻找新的抗癌作用靶点具有重要的理论和实践意义。
[参考文献]
[1] Ristimaki A，Sivula A，Lundin J ......
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