癌—睾丸抗原SSX基因在肝细胞癌中mRNA水平的表达及意义(2)
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参见附件。
1.3 统计学方法
应用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 RT-PCR测序结果
随机抽取的阳性表达PCR产物进行DNA测序，所得序列与基因库检索序列一致，证实所扩增产物为目的基因的片段。
2.2 SSX mRNA在肝癌细胞株的表达
在肝癌细胞株7404、HePG2、7721中，SSX-1、SSX-2、SSX-3 mRNA的表达不同，但是在每一种细胞株中至少有一种基因表达。在7404(图1)中，有SSX-1(422 bp)和SSX-3(378 bp)表达；在HePG2(图2)中，有SSX-2(435 bp)和SSX-3(378 bp)表达；在7721(图3)中，只有SSX-3(378 bp)表达。p53(763bp)作为内参，均有表达。
1：DL600 Marker；2：SSX-1；3：SSX-2；4：SSX-3；5：阴性对照
1：DL600 Marker；2：SSX-1；3：SSX-2；4：SSX-3；5：阴性对照
1：DL600 Marker；2：SSX-1；3：SSX-2；4：SSX-3；5：阴性对照
2.3 SSX mRNA在肝癌及癌旁组织中的表达
SSX基因在癌旁组织和肝硬化组织中均不表达。在肝癌组织中，SSX-1、SSX-2、SSX-3的表达阳性率分别为53.6%、35.7%、57.1%。p53(763 bp)作为内参，均有表达。见图4。
1：DL600 Marker；2：SSX-1；4：SSX-2；5：SSX-3；3、5、7：阴性对照
2.4 SSX表达率与肝癌临床指标的关系
SSX mRNA表达与肝癌患者的性别、年龄、HBV、AFP、病理分型、TNM分期、门静脉癌栓和肝硬化发生与否无显著相关性(P > 0.05)。见表1。
2.5 3种SSX基因共同表达情况
28例肝癌组织中，6例(21.4%)标本3种SSX基因均有表达，23例(82.1%)标本至少表达两种SSX基因。
3 讨论
本研究课题所收集的肝细胞癌组织中SSX-1、SSX-3基因表达阳性率较高(53.6%、57.1%)，SSX-2表达阳性率相对较低(35.7%)。这与以往研究所证实的SSX基因家族在肝癌中有较高表达相一致[8-10]，其高表达的特性(表达率大于50%)提示该基因家族可能与肝癌的发生、发展密切相关。本研究28例肝癌组织中，6例(21.4%)标本3种SSX基因均有表达，23例(82.1%)标本至少表达两种SSX基因；离体培养的肝癌细胞株7404、HePG2、7721中SSX1～3基因的表达虽各不相同，但至少有一种基因表达，同时也存在基因的共表达。这3种基因同时表达为采用多价疫苗进行肝癌的免疫治疗提供了实验依据。同时，本研究课题在癌旁组织和正常肝细胞株中没有检测到SSX基因的表达，与Chen等[11]发现在肝癌的少数癌旁组织中有微弱的SSX基因表达不相符，原因可能与样本量较少有关，可扩大样本量后再深入研究验证。SSX基因在肝癌中高频率表达，而在非癌中不表达，又为肝癌特异性免疫治疗提供了潜在靶位。
目前对于肝癌的诊断仍以AFP的检测和影像学检查为主，这两种方法都可能出现假阳性和假阴性，所以寻找一种特异性更高的诊断方法成为临床上的迫切所需。本研究结果与肝癌临床指标结合后发现：SSX1～3基因表达与年龄、性别、病理分型、TNM分期、HBV、血清AFP水平、门脉癌栓、肝硬化无显著相关性(P > 0.05)。而研究结果又显示：相当一部分AFP正常(≤ 20 μg/L)肝癌患者存在SSX基因表达，提示可以将SSX1～3基因mRNA作为肿瘤标志物，用于肝癌的辅助诊断。
[参考文献]
[1] Simpson AJ，Caballero OL，Jungbluth A，et al. Cancer/testis antigens，gametogenesis and cancer [J]. Nat Rev Cancer，2005，5：615-625.
[2] Van BN，Bonnet MC，Dreno B，et al. Tumoral and immunologic response after vaccination of melanoma patients with an ALVAC virus encoding MAGE antigens recognized by T cells [J]. Clin Oncol，2005，23：9008-9021.
[3] 马占福，杨冬，贺福初，等.KRAB型锌指蛋白在高等脊椎动物胚胎发育和肿瘤发生、发展中的调控功能[J].遗传，2010，32(5)：431-436.
[4] Ladanyi M. Fusions of the SYT and SSX genes in synovial sarcom [J] ......
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