线粒体DNA 3160～3755区域基因突变与2型糖尿病的关系(1)
 |
| 第1页 |
参见附件。
[摘要] 目的 研究线粒体DNA 3160～3755区域基因在延边地区2型糖尿病(T2DM)患者中的突变情况，探讨该区域线粒体基因突变与2型糖尿病的关系。 方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymorphism chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)技术和直接测序法对延边地区人群108例正常健康体检者、328例T2DM患者(其中2例合并耳聋)，进行线粒体DNA 3160～3755区域基因突变筛查。 结果 线粒体DNA 3316 G→A在糖尿病组和正常对照组中的突变率分别为3.7%和3.8%，两组间差异无统计学意义(P > 0.05)；3394 T→C在糖尿病组和正常对照组中的突变率分别为7.3%和1.9%，两组间差异有统计学意义(P < 0.05)；在糖尿病组及正常对照组中均未检测到线粒体DNA 3243 A→G、3593T→C和3714 A→G突变。 结论 线粒体DNA 3316 G→A突变与延边地区T2DM的发生无关；线粒体DNA 3394 T→C突变与延边地区T2DM的发生有关；线粒体DNA 3423 A→G，3593 T→C，3714 A→G突变在延边地区T2DM中的发生率为0，提示上述位点基因突变率极低。
[关键词] 糖尿病；线粒体基因；变异
[中图分类号] R587.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)02(b)-0007-03
糖尿病是一种遗传和环境多种因素综合作用的疾病，近年来研究提示，部分糖尿病的发生与线粒体基因突变有一定的关联[1-2]。WHO将线粒体基因突变型糖尿病归认为特殊类型的糖尿病。由于不同种族、不同地区的2型糖尿病(T2DM)患者中线粒体基因的突变率不同，线粒体基因突变与糖尿病关系的报道不一。本研究对延边地区328例T2DM患者(其中2例合并耳聋)及108例正常对照组线粒体DNA 3160～3755区域基因进行突变分析，旨在探讨延边地区T2DM患者中线粒体DNA 3160～3755区域基因突变情况及了解该地区该区域线粒体基因突变与T2DM的关系，进而从中筛选出线粒体基因突变型糖尿病。
1 资料与方法
1.1 一般资料
随机选取2009年12月～2012年2月在延边大学附属医院健康体检者108例，其中，男65例，女43例，平均年龄(30.4±9.7)岁，作为正常对照组，临床和实验室检查均正常，排除肝、肾、内分泌和心脑血管疾病，近3个月无服用任何药物史；选取同时期在延边大学附属医院内分泌科住院的T2DM患者328例作为2型糖尿病组，其中，男194例，女134例，平均年龄(35.1±6.9)岁。糖尿病诊断依据1999年WHO诊断标准，排除妊娠、急性感染、肿瘤、外伤、心、肝疾病及服用羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂、血管紧张素转换酶抑制剂、噻唑烷二酮类药物者。所有受检对象均为延边地区无血缘关系个体，均签署知情同意书。两组一般情况比较，差异无统计学意义(P > 0.05)，具有可比性。本研究均在医院伦理委员会通过情况下进行研究。
1.2 研究方法
1.2.1 基因组DNA提取 采用Promega公司生产的Wizard@ Genomic DNA Purification Kit提取DNA。取被受检者肘静脉血2 mL到加有EDTA抗凝剂的真空采血管中，并立刻颠倒混匀，置于离心机中3 000 r/min离心10 min，取300 μL白细胞加入到1.5 mL离心管中，按照细胞裂解、核裂解、RNA去除、沉淀蛋白质、析出DNA、清洗DNA、水化DNA的过程分别加入试剂，进行DNA的提取。所得DNA经紫外分光光度计定量，并置于-70℃保存备用。
1.2.2 PCR扩增mtDNA 3160～3755区域基因片段 根据GenBank中的序列参考文献报道[2]，采用长春百奥生物技术有限公司合成上游引物：5'-AGCGCCTTCCCCGGTAAATGA- 3'，下游引物：5'-AGAATGATGGCTAGGGTGACTTC- 3'。PCR扩增体系(50 μL)包括：5×Green GO Taq Buffer 10 μL，MgCl2 2 μL，dNTP 1 μL，上游引物1 μL，下游引物1 μL，Taq DNA聚合酶0.25 μL，灭菌注射用水29.75 μL，DNA 5 μL；PCR循环参数：95℃预变性5 min，94℃变性45 s，56℃退火35 s，72℃延伸45 s，循环35次，最后72℃延伸7 min。用2%琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增产物。
1.2.3 PCR产物的限制性酶切 20 μL酶切体系包括：PCR产物5 μL，HaeⅢ内切酶 0 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(3054kb)。