人颗粒裂解肽突变子在大肠埃希菌中的构建与表达研究(1)
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[摘要] 目的 构建NKG5突变基因的原核表达载体并进行表达研究。 方法 采用寡核苷酸合成的方法，拼接成为NKG5-Ser的编码序列，克隆到pGEMT载体上，测序正确后，再切下编码序列连接到质粒pGEX-4T-1中，重组表达载体转化大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS，用IPTG诱导使融合蛋白高效表达。 结果 成功获得重组表达载体pGEX-4T-1-NKG5-Ser，转染大肠埃希菌BL21(DE3)pLysS，诱导表达后，SDS-PAGE和免疫印迹反应均显示显示出相对分子量(Mr)为35 kD的蛋白条带，证明融合蛋白表达成功。 结论 获得了突变NKG5与GST的融合蛋白，为进一步的工作打下了基础。
[关键词] 颗粒裂解肽；突变基因；融合蛋白；原核表达
[中图分类号] R978.3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)05(b)-0026-04
最初是由Jongstra等发现的一种短肽，称为519，1997年Pena等把这种短肽命名为颗粒裂解肽(NKG5)[1-2]；NKG5是一种细胞毒性效应蛋白，属于SAPLIP(saposin like protein)家族成员，它能够选择性地在NK细胞和激活后的T淋巴细胞中表达，其天然肽和重组肽都具有广谱抗菌活性，对G+和G-细菌、真菌、寄生虫均有杀菌活力，如鼠伤寒沙门菌、单核李司特菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌，真菌有新型隐球菌、白念珠菌，寄生虫有利什曼虫，尤其是对分枝杆菌有直接的细胞毒性[1]，它与穿孔素和粒酶在溶淋巴颗粒上有协同作用[3]。
引起笔者注意的是NKG5在体外不仅表现为对结核分枝杆菌很强的杀伤作用 ......
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