棕色脂肪干细胞与白色脂肪干细胞移植对心肌梗死大鼠心功能的影响(2)
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参见附件。
1.2.6 心功能检测 术后4周进行心脏超声检测心脏功能,由二维图像引导取M型曲线并进行测量,测量左心室收缩末期直径(LVESD)、舒张末期直径(LVEDD)。 左心室短轴缩短指数(FS)=[(LVEDD-LVESD)/LVESD]×100%;左心室射血分数(EF)=[(LVEDD3-LVESD3)/LVESD3]×100%。
1.2.7 组织学检测 心功能检测后处死动物,取心肌组织,4%多聚甲醛固定,制成石蜡切片,行马松三色(MASSON)染色、免疫组织化学染色和免疫荧光染色。免疫荧光染色使用工作浓度的一抗cTnT(1∶200),免疫组织化学染色使用工作浓度的一抗vWF(1∶200),对照组PBS替代一抗。微血管密度计数:vWAg染色阳性,位于心肌梗死部位,管腔可视并且血管直径在20~100 μm的微血管进行计数,取平均值。每个标本取5张切片,每张切片取5个高倍视野。
1.3 统计学方法
采用SPSS 15.0统计学软件进行数据分析,计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 棕色脂肪干细胞特征及表面标记
BADSCs分离后进行流式细胞仪测定,结果显示细胞表达CD90阳性,造血系标记CD45阴性。大约培养2周后,显微镜下可观察到形态拉长、呈肌细胞搏动形态的细胞,并呈现自发的有力的搏动。进一步进行免疫荧光学鉴定,发现这种肌细胞样的搏动细胞表达心肌特异性标志物cTnT(图1、2)。
2.2 白色脂肪干细胞特征及表面标记
ADSCs贴壁后类似成纤维样细胞,呈梭形生长。P3代ADSCs进行流式细胞仪检测结果显示 ......
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