激光联合环磷酰胺对小鼠肿瘤增殖及血管新生的影响(2)
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参见附件。
1.4.2 抑瘤率及脾指数照射 给药结束后第2天处死小鼠，测量荷瘤小鼠的体重，然后迅速将肿瘤组织完整剥出，称重、计算抑瘤率；摘取脾脏，称重、计算脾指数，公式如下：
抑瘤率=[(NS组平均瘤重-干预组平均瘤重)/NS组平均瘤重]×100%。脾指数=脾脏重(mg)/体重(g)。
1.4.3 原位杂交法检测瘤细胞VEGF mRNA表达肿瘤组织 称重后，将肿瘤组织置于10%中性甲醛中固定，常规石蜡包埋，5 μm切片，使用VEGF mRNA原位杂交检测试剂盒，检测肿瘤VEGF mRNA。NS组用磷酸盐缓冲液(PBS)代替原位杂交探针，结果肿瘤细胞中无阳性表达，提示本实验检测VEGF mRNA是特异性表达。在图像分析系统下观察各组瘤细胞VEGF mRNA表达。
1.4.4 肿瘤微血管密度(microvessel density，MVD)的检测 免疫组化SP法染色血管，经染色后内皮细胞褐染，血管呈黄褐色，易于辨认。先在低倍视野下选取肿瘤内新生血管最丰富的区域，即“热点”，然后在200倍视野范围，计数被染成棕色的微血管数目，取5个视野的平均值作为MVD值。
1.4.5 瘤组织增殖细胞核抗原PCNA表达 采用免疫组化SP法检测，按照试剂盒说明书进行操作。每个标本切片低倍视野下观察，确定有代表性的PCNA染色阳性部位，选择5个视野，400倍镜下每个视野选取200个肿瘤细胞，观察并计算阳性细胞总数。细胞核着色呈棕褐色或棕黄色为阳性细胞，PBS为一抗的阴性对照片无棕黄色染色。
1.5 统计学方法
采用统计软件SPSS 15.0对数据进行分析，正态分布的计量资料以均数±标准差(x±s)表示 ......
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