不同剂量辛伐他汀对慢性心房重构犬心房肌细胞内游离钙离子浓度的影响(2)
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1 材料与方法
1.1 材料
28只健康杂种犬均购自潍坊医学院实验中心，雌雄不限，体重8～11.5 kg。将其随机分成4组：对照组，起搏组，干预1组，干预2组，每组各7只。
1.2 方法
1.2.1 动物模型的制备 实验动物用3%戊巴比妥钠麻醉(30 mg/kg)。采用右侧开胸法暴露右心房。将起搏电极缝于右心耳，电极导线由皮下窦道引至颈部传出备用。术后第2天起，干预1组喂服默沙东制药有限公司生产的辛伐他汀(批号S1203)10 mg/d，干预2组60 mg/d。术后第6天开始以480 次/min的频率通过备用电极快速起搏右心房(对照组只手术不起搏)。连续刺激6 d后，取各组犬右心房组织，测定心房肌细胞游离钙浓度
1.2.2 测定游离钙浓度 采用美国Sigma公司分装的胰蛋白酶分解法获得心房肌细胞悬液。以4℃预冷PBS液洗去所取犬右心耳组织血液，将组织剪碎，放入含有0.25%胰蛋白酶溶液的培养皿中，置于37℃温箱中消化40 min。2000 r/min离心15 min，弃去上清液，加入D-Hank′s液，吹打，离心，弃去上清液，吹匀沉淀细胞，得到细胞悬液。取适量悬液于印孔载玻片上加入稀释后的美国Biotium公司生产的Fluo-3/Am 20 μL，37℃避光孵育30min。利用德国ZEISS公司生产的共聚焦显微镜扫描细胞内荧光强度。发射波长520 nm，激发波长488 nm。计算细胞内平均荧光强度，荧光强度越大，表示细胞内游离Ca2+浓度越高，反之则浓度越低。
1.3 统计学方法
采用SAS 9.1软件进行统计分析统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示，两组间比较采用t检验；多组间比较采用单因素方差分析，两两比较的SNK-q检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
图1a～d依次为对照组、起搏组、干预1组、干预2组共聚焦显微镜下的单个心房肌细胞 ......
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