蛋白磷酸酶2A的癌性抑制因子在前列腺癌中的表达及意义王(2)
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1 资料与方法
1.1 一般资料
选择昆明医科大学第三附属医院2009年1月～2012年4月手术治疗的前列腺癌患者65例作为试验组，年龄51～79岁，平均(63.8±6.2)岁，其中42例患者标本来自经尿道前列腺电切术，23例患者经穿刺活检病理证实后行耻骨上前列腺癌根治术；所有患者均未进行放化疗及激素和外科去势治疗。选取同期昆明医科大学第三附属医院治疗的良性前列腺增生患者65例的组织标本作为对照组，年龄52～83岁，平均(63.1±5.8)岁，所有标本是由经尿道前列腺电切术获得；获取后标本于15 min内-80℃的冰箱内保存。标本的分离和使用都分别通过医院伦理审查委员会的批准。
1.2 方法
65例前列腺癌标本均采用免疫印迹(Western blot)法进行CIP2A的测定，取前列腺癌组织匀浆，加入裂解液孵育4℃，10 min。以12 000 r/min，4℃，离心10 min，取上清。将蛋白上清溶于5×SDS上样缓冲液，95℃，水浴10 min，各取上清30 μg进行10% SDS-PAGE电泳。电泳结束后用湿转法将样品转移至PVDF膜。将PVDF膜放入含有5% BSA的TBS/T中，4℃包被过夜。抗体孵育。将膜置于ECL显色液中，室温避光孵育1 min。压片、曝光、显影。实验中设不加一抗的空白对照组，实验重复5次。以α-Tubulin作为内参。图像以GS800 Calibrated Densitometer 扫描仪进行灰度扫描。所有标本常规制作HE染色。HE染色后由2名病理科医师共同阅片进行Gleason分级。按照分化程度分为5级即Gleason分级(1～5)分，将肿瘤细胞的主要成分和次要成分别记分 ......
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