酶联免疫吸附法测定红细胞内多聚谷氨酸化甲氨蝶呤浓度的方法建立及其初步应用(2)
2.4蛋白沉淀实验及溶液pH值对实验影响
将100 μL上述转化液在分别加入10 μL的0.3%高氯酸、10 μL 1%三氯乙酸、100 μL饱和硫酸铵溶液，分别观察三种蛋白沉淀剂对实验影响见图3A。由图可见：3种蛋白沉淀剂差异无统计学意义(P > 0.05)。将加完蛋白沉淀剂的转化液混匀，12 000g高速离心5 min，用1 moL/L的氢氧化钠将上清液pH值调为3～9，不同pH值下结果见图3B，最适pH为6～8，最佳pH值为6.8。
2.5 方法学验证实验
灵敏度实验将标准MTXPG稀释成不同浓度，测得其标准曲线见图4A，由图可得灵敏度为0.096 ng/mL，线性方程为Y=-0.7859X+0.9007(r = 0.9967)，线性范围为0.2 ～10.0 ng/mL，其中X为浓度的对数值，Y为吸光度。精密度实验，将标准MTXPG溶液加入空白红细胞中，配制为1、2.5、5、7.5 ng/mL 4个不同浓度水平的待测样本 ......
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将100 μL上述转化液在分别加入10 μL的0.3%高氯酸、10 μL 1%三氯乙酸、100 μL饱和硫酸铵溶液，分别观察三种蛋白沉淀剂对实验影响见图3A。由图可见：3种蛋白沉淀剂差异无统计学意义(P > 0.05)。将加完蛋白沉淀剂的转化液混匀，12 000g高速离心5 min，用1 moL/L的氢氧化钠将上清液pH值调为3～9，不同pH值下结果见图3B，最适pH为6～8，最佳pH值为6.8。
2.5 方法学验证实验
灵敏度实验将标准MTXPG稀释成不同浓度，测得其标准曲线见图4A，由图可得灵敏度为0.096 ng/mL，线性方程为Y=-0.7859X+0.9007(r = 0.9967)，线性范围为0.2 ～10.0 ng/mL，其中X为浓度的对数值，Y为吸光度。精密度实验，将标准MTXPG溶液加入空白红细胞中，配制为1、2.5、5、7.5 ng/mL 4个不同浓度水平的待测样本 ......
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