miRNA—181a及其靶基因共济失调—毛细血管扩张突变基因在胃癌组织中的表达及意义(2)

http://www.100md.com 2015年5月25日 中国医药导报2015年第15期

     1 对象与方法

    1.1 对象

    选取2009年4月1日～2011年12月1日广州市第一人民医院外科手术切除的胃癌标本9例，同时选取其癌旁非癌组织标本作为对照。通过病理专家确定所选胃癌标本均为中晚期胃癌，且入选患者术前均未行放、化疗等治疗。配对的癌旁非癌组织取其距胃癌癌灶边缘5 cm以上，术后经液氮速冻保存在-80℃冰箱。本研究经广州市第一人民医院医学伦理委员会通过，所有患者知情同意并签署知情同意书。

    1.2 靶基因的预测

    运用3个生物信息学预测软件，预测miR-181a的靶基因。MiRanda、PicTar及TargetScan。

    1.3 引物设计及合成

    在miRNA Base数据库和GeneBank数据库中基因序列的查找，引物设计采用Primer express 2.0软件。内参照U6及miR-181a由丹麦生物工程公司Exiqon设计、合成。

    1.4 检测miR-181a

    采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术 ......