辛伐他汀对缺血再灌注损伤下内皮祖细胞凋亡的影响(2)

http://www.100md.com 2015年7月5日 中国医药导报2015年第19期

     1.3.2 缺血再灌注模型的建立及实验分组 本研究采用连二亚硫酸钠(Sodium hydrosulfite，Na2S2O4)制备的缺血再灌注模型是在余薇等[3]的研究基础上稍加改造而成。消化并重悬生长良好的EPCs于细胞培养板内，将EPCs随机分成3组，每组设立5个复孔。待细胞生长稳定后模型组更换缺血缓冲液，该缓冲液被设计来模拟心肌缺血时细胞外环境的变化，如活体内相似的钾、钠离子等。缺血3 h后更换选择性培养基，继续培养21 h后进行各项检测。将EPCs随机分为三组：对照组(C组)：选择性培养基培养2 d；缺血再灌注组(IR组)：第1天用选择性培养基培养，第2天加入缺血缓冲液，刺激细胞3 h后，换成选择性培养基，继续培养21 h；辛伐他汀组(S组)：第1天选择性培养基培养，第2天添加最佳浓度阿托伐他汀后继续培养1 d。

    1.4 观察指标

    1.4.1 MTT法检测各组EPCs的增殖率 用含0.25%EDTA的胰酶消化一瓶生长良好的EPCs，按照3×104/mL密度重悬后加入到96孔板中，每孔体积为100 μL。待EPCs生长稳定后，按“1.3.2”中的方法分组(每组5个复孔)及处理后，弃去上清液，PBS缓冲液轻轻洗涤2次，之后每孔加入MTT工作液(5 mg/mL)各10 μL及选择性培养基各90 μL ......