[摘要] 目的 构建Toll样受体(TLR)4基因慢病毒表达载体介导的小干扰RNA(siRNA)，观察其对大鼠肺泡巨噬细胞NR8383 TLR4的沉默效应。 方法 设计4条针对TLR4基因的siRNA靶序列，经合成、退火、酶切，与线性载体GV115连接，转入细菌感受态细胞，经聚合酶链反应(PCR)筛选阳性克隆、测序鉴定。共转染293T细胞，包装产生慢病毒颗粒，分别感染NR8383细胞，实时定量PCR(RT-PCR)检测NR8383细胞TLR4 mRNA的表达。根据筛选结果，选取最有效的载体进行病毒大量包装。 结果 经测序验证，慢病毒载体构建成功并获得相应的慢病毒，NR8383细胞感染慢病毒后，TLR4基因mRNA表达明显下降，LV-TLR4-RNAi(Tgt-2)作用较明显 ......