2.2.3 血浆样品预处理 取血浆100 μL置于10 mL离心管中，加入8 μL内标液，涡旋混合30 s，再加入萃取剂乙酸乙酯1.5 mL进行液液萃取，涡旋振荡3 min，4000 r/min离心5 min，吸取上清液，50～55℃水浴，氮气流下吹干，残渣用100 μL流动相涡旋3 min复溶，4000 r/min离心5 min，取上清液20 μL进样测定。

    2.2.4 系统专属性考察 按“2.2.3”项下方法分别制得空白血浆、空白血浆中加入茶碱和内标溶液、大鼠灌胃给予氨茶碱(20 mg/kg)后1 h血浆的高效液相色谱图，茶碱与内标咖啡因的保留时间分别为4.5 min和7.2 min，二者峰形良好，理论塔板数4000左右，且血浆中其他成分不干扰茶碱的测定。见图1。

    a.空白血浆；b.空白血浆+茶碱与内标溶液；c.大鼠灌胃给予氨茶碱后1 h血浆；1：茶碱；2：咖啡因

    图1 系统专属性考察色谱图

    2.2.5 标准曲线的制备 取空白血浆100 μL 7份，分别加入茶碱对照品梯度浓度溶液10 μL，制备相当于茶碱浓度为0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.7、25.4 μg/mL的标准系列血样 ......