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编号:12757839
葡萄糖调节蛋白GRP78在小梁网细胞中的表达及临床意义(2)
http://www.100md.com 2016年1月25日 中国医药导报 2016年第3期
     1 材料与方法

    1.1 药品与试剂

    DMEM/F12培养基购于Gibco公司,胎牛血清购于杭州四季青公司,二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)、衣霉素(Tunicamycin,Tm)、十字孢碱(Staurosporine,STS)购于美国Sigma公司,逆转录试剂盒购于Fermentas公司,Western blot检测试剂盒购于Cell Signaling公司。

    1.2实验分组

    收集健康供体及青光眼患者小梁网组织进行原代培养并进行传代[9]。将第3代小梁网细胞接种于25 cm2培养瓶底,DMEM-F12培养液(含质量分数15%胎牛血清,60 mg/L青霉素,100 mg/L链霉索)培养。将NTM、GTM细胞接种于培养瓶,待细胞完全融合后,分别加入含有1 μmol/L Tm培养液、0.1 μmol/L STS培养液和不含上述任何药物的培养液,分为Tm组、STS组、对照组,每天换液,处理6~24 h。采用Real-time PCR、Western blot方法检测药物处理6、24 h后小梁网细胞中GRP78 mRNA及蛋白的表达 ......
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