1.2.2 PCR引物设计及DNA扩增

    1.2.2.1 Ⅱ类拓朴异构酶基因片段的PCR引物设计 gyrA：gyrA1：5'-GGC CTG AAG CCG GTG CAC-3'，gyrA2：5'-CAC GGC GAT ACC GCT GGA-3'；gyrB：gyrB1：5'-GCG GTG GAA CAG GAG ATG GGC AAG TAC-3'，gyrB2：5'-CTG GGG GAA GAA GAA GGT CAA CAG CAC GGT-3'；parC：parC1：5'-CTG GAT GCC GAT TCC AAG CAC-3'，parC2： 5'-GAA GGA CTT GGG ATC GTC CGG-3'；parE：parE1：5'-CGG CGT TCG TCT CGG GCG TGG TGA AGG-3'，parE2：5'-TCG AGG GCG TAG TAG ATG TCC TTG CCG-3'。

    1.2.2.2 PCR扩增条件建立 反应体系为50 μL，5 μL 10×Ex Taq buffer+27 μL ddH2O，一对引物各3 μL，5 μL 4×DNTP，4 μL MgCl2，1 μL Taq聚合酶，2 μL铜绿假单胞菌DNA模板。扩增条件为94℃进行预变性4 min；循环参数：94℃变性4 min ......