铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药性探讨(1)
[摘要] 目的 探讨铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物耐药性情况。 方法 采集2014年1月～2015年2月于德清县第三人民医院住院的3000例患者痰液、脓汁标本，按常规方法分离铜绿假单胞菌，从中选择30株铜绿假单胞菌喹诺酮耐药菌株进行试验。选择铜绿假单胞菌野生型标准株作为对照。通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)进行gyrA、gyrB、parC和parE基因QRDR氨基酸变化结果分析。 结果 30株铜绿假单胞菌喹诺酮耐药菌株中有3株没有发生Ⅱ类拓朴异构酶基因突变，其余均发生基因突变，突变率达到90%。基因突变主要集中在gyrA编码的83位密码子、parC的80位密码子。 结论 探讨铜绿假单胞菌Ⅱ类拓扑异构酶基因突变特点，对突变株进行药物敏感试验，可以为临床合理用药提供可靠的理论依据。
[关键词] 铜绿假单胞菌；喹诺酮类药物；耐药性
[中图分类号] R378.991 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2016)02(a)-0117-04
Discuss of tolerance of Pseudomonas aeruginosa to quinolone drugs
ZHU Qinhong
Department of Laboratory， the Third People's Hospital of Deqing County， Zhejiang Province， Deqing 313201， China
[Abstract] Objective To discuss the tolerance of Pseudomonas aeruginosa to quinolone drugs. Methods The specimens of sputum and pus from 3000 cases inpatients in the Third People's Hospital of Deqing County from January 2014 to February 2015 were collected， Pseudomonas aeruginosa was separated by conventional method. 30 plants of Pseudomonas aeruginosa quinolone resistant strains were selected for experiment. The wild type standard strains of Pseudomonas aeruginosa was selected as control. The QRDR amino acid changing result of gyrA， gyrB， parC and parE genes were analyzed by PCR-RFLP. Results 3 plants had no mutation of Ⅱ type topology isomerase gene among 30 plants of Pseudomonas aeruginosa quinolone resistant strains， the other plants had gene mutation， the mutation rate was 90%. The gene mutation mainly focused on 83 codon of gyrA coding， 80 codon of parC. Conclusion Discuss of characteristics of Ⅱ type topology isomerase gene mutation， test of drug sensitive for mutant strain， can provide reliable theory basis for clinical rational drug use.
[Key words] Pseudomonas aeruginosa； Quinolone drugs； Tolerance
铜绿假单胞菌是医院感染常见的致病菌之一，在重症肺炎或者下呼吸道感染患者中检出率比较高，对于病情有不利影响[1-2]。一般情况下，铜绿假单胞菌感染治疗无效的主要原因是铜绿假单胞菌产生耐药性，如果患者出现多种耐药情况，会造成治疗难度增加。铜绿假单胞菌耐药机制比较复杂，其中包括DNA拓朴异构酶突变、主动外排系统、产生β内酰胺酶及氨基糖苷修饰酶等。一直以来喹诺酮类耐药作用的靶点主要集中在DNA拓扑异构酶Ⅱ和Ⅳ，其中DNA拓扑异构酶Ⅱ包括GyrA和GyrB两个亚基，其主要通过gyrA和gyrB基因进行编码，而DNA拓扑异构酶Ⅳ则是通过parC和parE基因进行编码。长期以来对于铜绿假单胞菌耐药性的研究比较多，但是关于铜绿假单胞菌对于喹诺酮类药物耐药性相关机制的研究却相对较少[3-4]。本研究通过对铜绿假单胞菌耐药情况进行观察，拟分析其对喹诺酮类药物耐药性的机制，尤其探讨了DNA拓扑异构酶基因突变情况，现将结果报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
2014年1月～2015年2月采集于德清县第三人民医院住院的3000例患者痰液、脓汁标本，按常规方法分离铜绿假单胞菌，从中选择30株喹诺酮耐药菌株进行试验。选择铜绿假单胞菌野生型标准株ATCC27853作为对照。
1.2 方法
1.2.1 铜绿假单胞菌DNA提取
将单一菌落在培养基中培养，离心收集菌体，采用细菌DNA提取试剂盒提取铜绿假单胞菌DNA，采用0.5%琼脂糖凝胶电泳，通过紫外灯光观察结果[5-6]。, 百拇医药(诸琴红)
[关键词] 铜绿假单胞菌；喹诺酮类药物；耐药性
[中图分类号] R378.991 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2016)02(a)-0117-04
Discuss of tolerance of Pseudomonas aeruginosa to quinolone drugs
ZHU Qinhong
Department of Laboratory， the Third People's Hospital of Deqing County， Zhejiang Province， Deqing 313201， China
[Abstract] Objective To discuss the tolerance of Pseudomonas aeruginosa to quinolone drugs. Methods The specimens of sputum and pus from 3000 cases inpatients in the Third People's Hospital of Deqing County from January 2014 to February 2015 were collected， Pseudomonas aeruginosa was separated by conventional method. 30 plants of Pseudomonas aeruginosa quinolone resistant strains were selected for experiment. The wild type standard strains of Pseudomonas aeruginosa was selected as control. The QRDR amino acid changing result of gyrA， gyrB， parC and parE genes were analyzed by PCR-RFLP. Results 3 plants had no mutation of Ⅱ type topology isomerase gene among 30 plants of Pseudomonas aeruginosa quinolone resistant strains， the other plants had gene mutation， the mutation rate was 90%. The gene mutation mainly focused on 83 codon of gyrA coding， 80 codon of parC. Conclusion Discuss of characteristics of Ⅱ type topology isomerase gene mutation， test of drug sensitive for mutant strain， can provide reliable theory basis for clinical rational drug use.
[Key words] Pseudomonas aeruginosa； Quinolone drugs； Tolerance
铜绿假单胞菌是医院感染常见的致病菌之一，在重症肺炎或者下呼吸道感染患者中检出率比较高，对于病情有不利影响[1-2]。一般情况下，铜绿假单胞菌感染治疗无效的主要原因是铜绿假单胞菌产生耐药性，如果患者出现多种耐药情况，会造成治疗难度增加。铜绿假单胞菌耐药机制比较复杂，其中包括DNA拓朴异构酶突变、主动外排系统、产生β内酰胺酶及氨基糖苷修饰酶等。一直以来喹诺酮类耐药作用的靶点主要集中在DNA拓扑异构酶Ⅱ和Ⅳ，其中DNA拓扑异构酶Ⅱ包括GyrA和GyrB两个亚基，其主要通过gyrA和gyrB基因进行编码，而DNA拓扑异构酶Ⅳ则是通过parC和parE基因进行编码。长期以来对于铜绿假单胞菌耐药性的研究比较多，但是关于铜绿假单胞菌对于喹诺酮类药物耐药性相关机制的研究却相对较少[3-4]。本研究通过对铜绿假单胞菌耐药情况进行观察，拟分析其对喹诺酮类药物耐药性的机制，尤其探讨了DNA拓扑异构酶基因突变情况，现将结果报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
2014年1月～2015年2月采集于德清县第三人民医院住院的3000例患者痰液、脓汁标本，按常规方法分离铜绿假单胞菌，从中选择30株喹诺酮耐药菌株进行试验。选择铜绿假单胞菌野生型标准株ATCC27853作为对照。
1.2 方法
1.2.1 铜绿假单胞菌DNA提取
将单一菌落在培养基中培养，离心收集菌体，采用细菌DNA提取试剂盒提取铜绿假单胞菌DNA，采用0.5%琼脂糖凝胶电泳，通过紫外灯光观察结果[5-6]。, 百拇医药(诸琴红)