1.5 IMAC纯化柱纯化包涵体蛋白

    取10 mL包涵体蛋白液，7000 r/min 4℃离心10 min后，沉淀溶于4 mL结合液中，上柱与Ni-Agarose介质结合2 h，结合液洗柱3次后分别用40、60、80、100、150、200、300、400、500 mmol/L咪唑洗脱结合蛋白，SDS-PAGE电泳检测纯化效果。

    1.6 不同浓度饱和硫酸氨纯化包涵体蛋白

    取9管1 mL包涵体蛋白液，震荡滴加饱和硫酸氨，使饱和硫酸氨终浓度分别为10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%，置4℃冰箱2 h后7000 r/min，4℃离心10 min，沉淀用1 mL PBS溶解后加饱和硫酸氨液体使其终浓度达到上述浓度进行沉淀，反复3次溶解、沉淀后，沉淀溶于1 mL PBS中，SDS-PAGE电泳检测其纯化效果。

    2 结果

    2.1 差速离心纯化

    EV71 VP1重组质粒诱导表达前在33 kD处未见蛋白表达带；诱导表达6 h后在33 kD处可见一条高浓度的蛋白表达带 ......