1.2 方法

    1.2.1 细胞培养及5-Fu耐药细胞株建立 4T1乳腺癌细胞采用RPMI-1640(含有10%胎牛血清)培养液，在37℃、5%CO2条件下于培养箱中培养，每2～3天更换培养液，用0.25%胰蛋白酶消化传代。实验时取对数生长期细胞。以浓度递增的方法建立4T1/5-Fu耐药细胞株。5-Fu起始浓度为1 ng/mL，最后直到细胞在含5-Fu 100 ng/mL培养基中呈指数生长，历时12个月，得到耐药细胞系命名为4T1/5-Fu。

    1.2.2 细胞药物敏感性实验(MTS) 收集对数生长期细胞，计数，接种于96孔培养板中，于37℃、5%CO2培养箱中培养过夜。24 h后加入不同浓度的药物处理细胞，置于培养箱中孵育48 h后，每孔加入MTS(5 g/L)20 μL，混匀后在培养箱中孵育2 h，最后在酶标仪上测定波长490 nm吸光度值(A490)。根据所测吸光度值计算出药物各浓度处理组的生存率及抑制率，并通过药物浓度和其抑制率的直线回归方程，得出耐药细胞系和亲本细胞系对药物的IC50值，计算细胞耐药指数(RI)=耐药细胞IC50/亲本细胞IC50 ......