1.3.2 人血小板聚集 在富含人血小板血浆(PRP)中加入apyrase(终浓度2 U/mL)和EDTA(终浓度为5 mmol/L)，室温离心，1900 r/min 10 min，得到血小板，重悬于台式缓冲液中，用全血细胞计数仪计数并稀释为3×108个/mL，37℃水浴静置1 h。不同浓度的白术内酯Ⅱ与洗涤人血小板(每管300 μL)孵育3 min，使用血小板聚集仪检测在胶原诱导下白术内酯Ⅱ对人血小板聚集程度的影响[7]。

    1.3.3 血小板在纤维蛋白原上的铺展 将制备好的洗涤人血小板稀释为3×107个/mL，取100 μL加到已铺有纤维蛋白原的玻璃爬片上，置于37℃恒温箱中孵育1 h；洗去爬片上未与纤维蛋白原结合的血小板，每个爬片上加100 μL鬼笔环肽染料，室温避光孵育30 min；封片；使用正置显微镜的油镜观察并拍照，用NIH Image J 软件计算铺展血小板的面积[8]。

    1.3.4 Akt473分子的磷酸化水平检测 人血小板样品用2×SDS裂解液裂解并煮沸，用10%的聚丙烯酰氨凝胶电泳分离，并转到聚乙二烯氟化物膜上 ......