蛙血清小分子肽的分离鉴定及生物活性检测(2)
1.4 蛙血清小分子肽的分离和鉴定
1.4.1 超滤 蛙血离心取上清，乙醇去蛋白，蒸馏回收乙醇，得蛙血清去蛋白提取物。将其倒入超滤杯中进行超滤[5]。用截留相对分子质量为3000的超滤膜超滤，收集滤过液，再用截留相对分子质量为1000的超滤膜超滤，收集滤膜上保留液，低温保存。
1.4.2 RP-HPLC分离纯化 分离柱：Sepax C18柱；洗脱液A为0.1%三氟乙酸(TFA)/H2O，洗脱液B为0.1%三氟乙酸(TFA)/乙腈；流速为1.0 mL/min，检测波长为215 nm，柱温箱温度为40℃。每次上样100 μL，收集洗脱峰，用质谱仪鉴定洗脱峰中物质的分子量[6]。
1.4.3 质谱分析 在MALDI-TOF/TOF Mass质谱仪上进行一级质谱(MS)和串联质谱(MS/MS)分析[6]。CCA基质：0.1%TFA、50%ACN、50%H2O。取1 μL样品与3 μL CCA基质混合均匀，取0.5 μL混合液在按规律分别在板上点样，风干后送入机内检测 ......
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1.4.1 超滤 蛙血离心取上清，乙醇去蛋白，蒸馏回收乙醇，得蛙血清去蛋白提取物。将其倒入超滤杯中进行超滤[5]。用截留相对分子质量为3000的超滤膜超滤，收集滤过液，再用截留相对分子质量为1000的超滤膜超滤，收集滤膜上保留液，低温保存。
1.4.2 RP-HPLC分离纯化 分离柱：Sepax C18柱；洗脱液A为0.1%三氟乙酸(TFA)/H2O，洗脱液B为0.1%三氟乙酸(TFA)/乙腈；流速为1.0 mL/min，检测波长为215 nm，柱温箱温度为40℃。每次上样100 μL，收集洗脱峰，用质谱仪鉴定洗脱峰中物质的分子量[6]。
1.4.3 质谱分析 在MALDI-TOF/TOF Mass质谱仪上进行一级质谱(MS)和串联质谱(MS/MS)分析[6]。CCA基质：0.1%TFA、50%ACN、50%H2O。取1 μL样品与3 μL CCA基质混合均匀，取0.5 μL混合液在按规律分别在板上点样，风干后送入机内检测 ......
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