定向结构Ⅰ/Ⅱ型胶原支架上兔软骨细胞生长增殖观察及新生组织生物力学检测(3)
1.3.2 构建新生组织工程软骨及相关检测
采用3周龄新西兰大白兔膝关节软骨为材料,经Ⅱ型胶原酶消化法提取关节软骨细胞[13],体外扩增培养至第2代,移液器吸取细胞悬液分别接种两组支架,细胞接种数量控制在10.0×105个/块。培养3 d后利用SEM观察软骨细胞在定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架和非定向支架上的形态及分布特点,采用MTT方法检测细胞在两组支架上的增殖情况。在共培养第7天和第14天利用生物材料力学测试机分别测定两组新生组织工程软骨的杨氏模量(0.05 N,速率0.01 mm/s,行程:初始高度的4%,松弛相:2000 s)和抗拉强度(5 mm/min拉伸),检测两组新生组织的生物力学性能。
1.4 统计学方法
采用SPSS 13.0统计软件,若数据符合正态分布以均数±标准差(x±s)表示。采用独立样本t检验(independent-tests)比较MTT法检测的细胞在两组支架上增殖情况,采用单因素方差分析(one-way ANOVA)比较两组新生组织工程软骨生物力学性能,以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 胶原紫外吸收峰及大体和显微镜观察支架结构
经过超微量分光光度计(Picdrop Application系统软件)测定Ⅰ型胶原蛋白的紫外光吸收值在226.5 nm左右形成一个波峰(图1a);Ⅱ型胶原凝胶在233.8 nm左右形成一个较高的波峰(图1b) ......
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采用3周龄新西兰大白兔膝关节软骨为材料,经Ⅱ型胶原酶消化法提取关节软骨细胞[13],体外扩增培养至第2代,移液器吸取细胞悬液分别接种两组支架,细胞接种数量控制在10.0×105个/块。培养3 d后利用SEM观察软骨细胞在定向Ⅰ/Ⅱ型胶原支架和非定向支架上的形态及分布特点,采用MTT方法检测细胞在两组支架上的增殖情况。在共培养第7天和第14天利用生物材料力学测试机分别测定两组新生组织工程软骨的杨氏模量(0.05 N,速率0.01 mm/s,行程:初始高度的4%,松弛相:2000 s)和抗拉强度(5 mm/min拉伸),检测两组新生组织的生物力学性能。
1.4 统计学方法
采用SPSS 13.0统计软件,若数据符合正态分布以均数±标准差(x±s)表示。采用独立样本t检验(independent-tests)比较MTT法检测的细胞在两组支架上增殖情况,采用单因素方差分析(one-way ANOVA)比较两组新生组织工程软骨生物力学性能,以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 胶原紫外吸收峰及大体和显微镜观察支架结构
经过超微量分光光度计(Picdrop Application系统软件)测定Ⅰ型胶原蛋白的紫外光吸收值在226.5 nm左右形成一个波峰(图1a);Ⅱ型胶原凝胶在233.8 nm左右形成一个较高的波峰(图1b) ......
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