氟伐他汀对同型半胱氨酸诱导的凝集素样氧化低密度脂蛋白受体—1表达的影响(2)
1.3 实验分组
实验分为五组：①正常对照组：HUVECs与培养基孵育24 h； ②Hcy刺激组：100 μmol/L Hcy与HUVECs孵育24 h；③低浓度氟伐他汀干预组：以0.1 μmol/L氟伐他汀预处理HUVECs后，再与Hcy共同培养24 h；④中浓度氟伐他汀干预组：以1 μmol/L氟伐他汀预处理HUVECs后，再与Hcy共同培养24 h；⑤高浓度氟伐他汀干预组：以10 μmol/L氟伐他汀预处理HUVECs后，再与Hcy共同培养24 h。每组4个样本。
1.4 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测LOX-1mRNA的表达
培养结束后按常规方法提取细胞总RNA，并进行纯化，反转录为cDNA。用于LOX-1基因序列扩增的引物序列：上游5'-AAGGACCAGCCTCATGAGAAG-3'，下游5'-TTGGCATCCAAAGACAAGCAC-3'。以β-actin为内参照物，引物序列：上游5'-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3'，下游5'-CTTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3'。PCR反应程序为：94℃变性3.5 min→94℃ 40 s→54℃ 退火1 min→72℃ 延伸1 min ......
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实验分为五组：①正常对照组：HUVECs与培养基孵育24 h； ②Hcy刺激组：100 μmol/L Hcy与HUVECs孵育24 h；③低浓度氟伐他汀干预组：以0.1 μmol/L氟伐他汀预处理HUVECs后，再与Hcy共同培养24 h；④中浓度氟伐他汀干预组：以1 μmol/L氟伐他汀预处理HUVECs后，再与Hcy共同培养24 h；⑤高浓度氟伐他汀干预组：以10 μmol/L氟伐他汀预处理HUVECs后，再与Hcy共同培养24 h。每组4个样本。
1.4 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测LOX-1mRNA的表达
培养结束后按常规方法提取细胞总RNA，并进行纯化，反转录为cDNA。用于LOX-1基因序列扩增的引物序列：上游5'-AAGGACCAGCCTCATGAGAAG-3'，下游5'-TTGGCATCCAAAGACAAGCAC-3'。以β-actin为内参照物，引物序列：上游5'-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3'，下游5'-CTTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3'。PCR反应程序为：94℃变性3.5 min→94℃ 40 s→54℃ 退火1 min→72℃ 延伸1 min ......
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