两种血管外膜成纤维细胞培养方法的比较与经验总结(2)
1.2 大鼠AFs的原代培养
1.2.1 大鼠血管外膜的获取 取雄性Sprague-Dawley大鼠，麻醉后断颈处死，立刻浸泡于75%酒精中，5 min后转移至无菌手术台上，沿正中线剪开大鼠胸腔和腹腔，可见胸腹主动脉沿脊柱左侧缘走形，剪取胸腹主动脉，浸泡于Hanks缓冲液中，无菌条件下转移至超净工作台。先用含青链霉素的灭菌磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline，PBS)冲洗血管内外残留的血液，钝性分离血管周围的结缔组织，然后用眼科剪将血管纵向剖开，使内膜面向上，用眼科弯镊自上而下轻轻刮除内膜后，再小心撕下近内膜面的中膜平滑肌层，剩余的絮状乳白色组织即为血管外膜[3，12-13]。
1.2.2 贴块法获得Afs 将血管外膜组织用眼科剪剪成大小约1 mm×1 mm×1 mm的组织块，均匀平铺在25 cm2培养瓶的底部。轻轻翻转培养瓶使瓶底面向上，向培养瓶中加入约6 mL含20% FBS的DMEM/F12培养基，务必不要将组织块冲掉。将培养瓶置入37℃、含5% CO2细胞培养箱中直立静置2～4 h后，慢慢翻转培养瓶，使培养液缓慢覆盖组织块，继续培养约72 h后，可见AFs自组织块周围爬出。此时，不常规换液 ......
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1.2.1 大鼠血管外膜的获取 取雄性Sprague-Dawley大鼠，麻醉后断颈处死，立刻浸泡于75%酒精中，5 min后转移至无菌手术台上，沿正中线剪开大鼠胸腔和腹腔，可见胸腹主动脉沿脊柱左侧缘走形，剪取胸腹主动脉，浸泡于Hanks缓冲液中，无菌条件下转移至超净工作台。先用含青链霉素的灭菌磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline，PBS)冲洗血管内外残留的血液，钝性分离血管周围的结缔组织，然后用眼科剪将血管纵向剖开，使内膜面向上，用眼科弯镊自上而下轻轻刮除内膜后，再小心撕下近内膜面的中膜平滑肌层，剩余的絮状乳白色组织即为血管外膜[3，12-13]。
1.2.2 贴块法获得Afs 将血管外膜组织用眼科剪剪成大小约1 mm×1 mm×1 mm的组织块，均匀平铺在25 cm2培养瓶的底部。轻轻翻转培养瓶使瓶底面向上，向培养瓶中加入约6 mL含20% FBS的DMEM/F12培养基，务必不要将组织块冲掉。将培养瓶置入37℃、含5% CO2细胞培养箱中直立静置2～4 h后，慢慢翻转培养瓶，使培养液缓慢覆盖组织块，继续培养约72 h后，可见AFs自组织块周围爬出。此时，不常规换液 ......
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