鼻黏膜外胚层间充质干细胞诱导分化成骨细胞的实验分析(2)
1.2 方法
1.2.1 大鼠鼻黏膜收集[5] 对SD大鼠进行戊巴比妥钠麻醉，达到麻醉效果之后处死。在超净工作台上剪下大鼠鼻道末端，收集1/3鼻中隔组织。将组织置于玻璃培养皿中，利用PBS进行3次洗涤，并对鼻中隔表面呼吸黏膜进行分离。
1.2.2 大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞培养[6] 对上述步骤采集到的呼吸黏膜进行处理，利用眼科剪剪为小碎块，添加胰蛋白酶进行消化。置于37℃恒温箱中消化5 min后取出，添加含有胎牛血清的DMEM/F12培养基终止消化。终止消化后进行离心，去掉上清，对细胞进行重悬，以1×106个/mL的浓度将细胞接种在培养瓶中，将培养瓶置入二氧化碳培养箱中进行常规原代和传代培养。
1.2.3 细胞免疫表型鉴定[7-8] 倒置显微镜下观察细胞生长情况，收集生长状态良好的P3细胞，分别用PE或FITC偶联的CD45-FITC、CD14-PE、CD105-PE、CD34-PE、CD71-PE、CD34-PE、CD44-PE对细胞进行标记，上流式细胞仪进行细胞免疫表型检测。
1.2.4 大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞增殖情况检测[9] 利用MTT法对细胞的增殖情况进行检测，收集P3细胞，胰蛋白酶消化之后制备细胞悬液，接种在96孔板中，添加完全培养基置于二氧化碳培养箱中进行培养。从接种后第1天起，每天取1板细胞，利用MTT法检对细胞增殖情况进行检测，使用酶联免疫检测仪检测各孔的光吸收值(OD值)，连续监测7 d。完成记录数据 ......
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1.2.1 大鼠鼻黏膜收集[5] 对SD大鼠进行戊巴比妥钠麻醉，达到麻醉效果之后处死。在超净工作台上剪下大鼠鼻道末端，收集1/3鼻中隔组织。将组织置于玻璃培养皿中，利用PBS进行3次洗涤，并对鼻中隔表面呼吸黏膜进行分离。
1.2.2 大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞培养[6] 对上述步骤采集到的呼吸黏膜进行处理，利用眼科剪剪为小碎块，添加胰蛋白酶进行消化。置于37℃恒温箱中消化5 min后取出，添加含有胎牛血清的DMEM/F12培养基终止消化。终止消化后进行离心，去掉上清，对细胞进行重悬，以1×106个/mL的浓度将细胞接种在培养瓶中，将培养瓶置入二氧化碳培养箱中进行常规原代和传代培养。
1.2.3 细胞免疫表型鉴定[7-8] 倒置显微镜下观察细胞生长情况，收集生长状态良好的P3细胞，分别用PE或FITC偶联的CD45-FITC、CD14-PE、CD105-PE、CD34-PE、CD71-PE、CD34-PE、CD44-PE对细胞进行标记，上流式细胞仪进行细胞免疫表型检测。
1.2.4 大鼠鼻黏膜外胚层间充质干细胞增殖情况检测[9] 利用MTT法对细胞的增殖情况进行检测，收集P3细胞，胰蛋白酶消化之后制备细胞悬液，接种在96孔板中，添加完全培养基置于二氧化碳培养箱中进行培养。从接种后第1天起，每天取1板细胞，利用MTT法检对细胞增殖情况进行检测，使用酶联免疫检测仪检测各孔的光吸收值(OD值)，连续监测7 d。完成记录数据 ......
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