RealtimePCR检测L1—CAM在大肠癌中的表达及其临床意义(2)
1.2 仪器与试剂
M-MLV逆转录酶(MBI Fermentas公司)，Trizol试剂(美国Invitrogen公司)，实时荧光PCR仪(德国Roche公司)。
1.3 方法
1.3.1 设计与合成 在GENEBANK查到引物基因序列，使用软件Primer Express 2.0进行设计。L1-CAM基因引物序列：上游5'-GGCACCAAATGGCTGTGAAG-3'；下游3'-CCAAAGGCCTTCTCCTCGTT-5'；产物大小256 bp。内参基因GAPDH引物序列：上游5'-AGAA GGCTGGGGCTCATTTG-3'；下游3'-AGGGGCCATCCACAGTCTTC-5'；产物大小258 bp。
1.3.2 标本制备 标本采集后迅速放到液氮中冷冻，置于-80℃冰箱保存。
1.3.3 RNA提取和cDNA合成 取50～100 mg组织样本用液氮研磨，加入Trizol中充分裂解后，加0.2 mL氯仿4℃离心15 min，取上清加入500 μL预冷的异丙醇 ......
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M-MLV逆转录酶(MBI Fermentas公司)，Trizol试剂(美国Invitrogen公司)，实时荧光PCR仪(德国Roche公司)。
1.3 方法
1.3.1 设计与合成 在GENEBANK查到引物基因序列，使用软件Primer Express 2.0进行设计。L1-CAM基因引物序列：上游5'-GGCACCAAATGGCTGTGAAG-3'；下游3'-CCAAAGGCCTTCTCCTCGTT-5'；产物大小256 bp。内参基因GAPDH引物序列：上游5'-AGAA GGCTGGGGCTCATTTG-3'；下游3'-AGGGGCCATCCACAGTCTTC-5'；产物大小258 bp。
1.3.2 标本制备 标本采集后迅速放到液氮中冷冻，置于-80℃冰箱保存。
1.3.3 RNA提取和cDNA合成 取50～100 mg组织样本用液氮研磨，加入Trizol中充分裂解后，加0.2 mL氯仿4℃离心15 min，取上清加入500 μL预冷的异丙醇 ......
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