serp1对过氧化氢诱导内皮细胞凋亡的保护作用(2)
1 对象与方法1.1 对象
大鼠血管内皮细胞(RAOEC,ATCC);DMEM高糖培养基、胎牛血清(美国Gibco公司);PCMV6-SERP1-tGFP质粒、PCMV6-empty质粒(美国oriGENE公司);荧光倒置显微镜(德国Zeiss公司)、一抗GLP-1R(美国Novus公司)、一抗serp1(美国Abcam公司)、一抗β-actin(美国Cell Signaling公司);Lipofectamine 2000(美国Invitrogen公司);Opti-MEM(美国GIBCO公司);BCA蛋白测定试剂盒(上海碧云天生物科技有限公司)。
1.2 内皮细胞转染及药物处理
将处于最佳生长期的内皮细胞接种于6孔板中,用未添加抗生素的含10%FBS高糖DMEM培养基于37℃、5%CO2孵箱中培养。在6孔板上标记空质粒组;空质粒+过氧化氢组;serp1质粒组、serp1质粒+过氧化氢组,以便后续转染及药物处理等实验操作。待细胞达到80%左右,开始转染 ......
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