1.3 肺动脉平滑肌细胞的分离和培养

    人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)购自美国Science Cell公司，大鼠肺动脉平滑肌原代细胞(RPASMC)分离自SD大鼠[北京市维通利华实验动物技术有限公司，合格证号：SCXK(京)2011-0011]肺动脉。

    1.4 靶基因3'-UTR荧光素酶载体及其突变载体的构建

    以大鼠的基因组DNA为模板，将pGL3-ccdb载体经双酶切后与基因的3'-UTR产物连接。BMPR2的3'-UTR突变引物，扩增产物连接到双酶切后的pGL3-ccdb载体，连接后转化酶切鉴定后进行测序分析。

    1.5 BMPR2蛋白表达检测

    采用Western blot法进行蛋白检测。4%～10%的预制胶电泳分离蛋白质，经湿转法将蛋白转移至硝酸纤维素膜上，一抗4℃摇床孵育过夜，用Totallab TL100图像分析软件对特异条带进行灰度扫描，并用相对灰度值表示蛋白相对含量。一抗浓度分别为：抗BMPR2(Abcam)1∶1000 ......