1.2 试剂与仪器

    miRNA-提取分离试剂盒、miRNA cDNA第一链合成试剂盒为天根生化科技(北京)有限公司产品，实时定量PCR试剂盒为德国Qiagen公司产品，高速冷冻离心机购自德国Eppendorf公司，紫外分光光度计购自美国基因有限公司，实时定量PCR扩增仪购自美国Bio-Rad公司，Cobas E601全自动电化学发光免疫分析仪购自瑞士Roche诊断公司。

    1.3 方法

    1.3.1 定量RT-PCR检测血浆中miR-451表达水平 所有研究对象均空腹无菌采集5 mL静脉血，放入EDTA抗凝管中，均在手术、放疗或化疗等抗肿瘤治疗前进行血样采集。采集的血样在25℃下2500 r/min离心10 min后吸取上层血浆至EP管中，再4℃ 12 000 r/min离心10 min后收集上层血浆至新的EP管中，-80℃保存用于实验。

    血浆中总RNA提取采用miRNA-提取分离试剂盒，利用紫外分光光度仪检测RNA溶液OD260及OD280值并计算OD260/OD280值，比值在1.8～2.1之间的RNA溶液符合质量要求，用于后续实验。

    使用miRNA cDNA第一链合成试剂盒进行cDNA第一链合成，实验操作严格按照试剂盒说明书进行 ......