1.6 Western blot分析

    收集不同浓度阿魏酸作用24 h后的A375细胞，置冰上用RIPA蛋白裂解液充分裂解，14 000 r/min离心15 min，小心收集上清，BCA法测定蛋白浓度。将各受试组总蛋白配成统一浓度后加入5X上样缓冲液混匀，100℃水浴中加热10 min，取50 μg总蛋白样品经10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳后，电转至PVDF膜(100 V，90 min)，5%脱脂奶粉(1XTBST配制)室温封闭1 h，一抗用MITF、C-KIT抗体(1∶1000)4℃孵育过夜，洗膜后用HRP标记的二抗(1∶10 000)室温孵育1 h，洗膜后用ECL试剂室温反应1 min，凝胶成像系统检测，曝光时间10 s，共10张。内参为GAPDH。

    1.7 统计学方法

    采用统计软件SPSS 19.0对数据进行分析，正态分布的计量资料以均数±标准差(x±s)表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验 ......