1.2 分组及糖尿病造模

    48只健康雄性Wistar大鼠室温25℃左右适应性饲养7 d，按随机数字表法分为糖尿病模型组(32只)、正常对照组(16只)，模型组又随机分为胰岛素致低血糖组(16只)、糖尿病非干预组(16只)。参照文献[3-4]糖尿病大鼠模型制备方法：高脂高糖饲料(其中20.0%蔗糖，15.0%猪油，3.0%胆固醇，1.0%胆酸盐)喂养1个月，予腹腔注射0.1 mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液稀释的25 mg/kg链脲佐菌素，注射前禁食12 h，3 d后取尾静脉血测得随机血糖>16.7 mmol/L示糖尿病模型制备成功。对照组大鼠腹腔仅注射等剂量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液，普通饲料常规饲养。

    1.3 胰岛素注射

    糖尿病模型制备成功后第4天开始皮下注射胰岛素，胰岛素致低血糖组大鼠术前禁食12 h，予普通胰岛素注射液0.4 U/kg皮下注射，1次/d，共12 d。低血糖反应标准[5]：肢体抽搐，反应明显迟钝甚至昏迷，血糖≤2.8 mmol/L，20 min后灌胃10%葡萄糖水1 mL，低血糖反应缓解或消除。对照组及糖尿病非干预组大鼠皮下注射同等剂量生理盐水。三组大鼠分别于开始胰岛素注射后第3、6、9、12天各取4例的脑组织，以低血糖反应20 min左右取脑为宜，取脑大鼠不予灌胃葡萄糖水。

    1.4 RT-PCR法NGF mRNA检测

    根据RT-PCR试剂盒说明以Trizol法提取大鼠脑组织总RNA ......