斑蝥酸钠维生素B6对人成骨肉瘤细胞凋亡及存活素表达的影响(2)
1.2 方法1.2.1 培养细胞 用人骨肉瘤细胞培养基来培养MG-63细胞。在37℃、5%CO2培养箱进行培养。在试验用倒置显微镜下来观察MG-63生长状态,在MG-63生长呈70%~80%融合状态时,用0.25%胰蛋白酶进行消化传代,每隔1 d换培养液,每隔3、4 d传代1次。
1.2.2 MTT方法测定细胞的增殖 将对数生长期的MG-63细胞数调整为1×105/mL,接种于96孔培养板内,于培养箱中进行培养,24 h后,将各孔内培养基吸出,加入药物浓度为0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 μg/mL斑蝥酸钠维生素B6的培养基,设置空白对照组,培养24、48、72 h,在结束前4 h,将10 μL MTT(浓度为5 mg/mL)加入培养孔内,继续在培养箱内培养4 h,弃上清液,各培养孔中加入10%二甲基亚砜150 μL,用振荡器震荡10 min,应用全自动酶标仪检测培养孔内的光密度值(OD),以492 nm為检测波长(参考波长620 nm)。测算不同药物浓度对MG-63生长的抑制率。抑制率=(1-实验组光密度值/对照组光密度值)×100% ......
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