D—900阴离子交换树脂纯化救必应中紫丁香苷工艺研究(1)
[摘要] 目的 研究D-900阴离子交换树脂对救必应中紫丁香苷的纯化工艺。 方法 采用高效液相色谱法和紫外分光光度法，以紫丁香苷保留率和溶液脱色率为指标，对树脂纯化条件进行考察。 结果 D-900阴离子交换树脂纯化最佳工艺为树脂重量和样品体积比为1∶5，树脂柱径高比为1∶5，上柱流速为2 BV/h，在此条件下紫丁香苷保留率达80%以上，溶液脱色率达30%以上。 结论 紫丁香苷粗分离液通过树脂纯化的工艺，简单易行。
[关键词] D-900阴离子交换树脂；救必应；紫丁香苷；纯化
[中图分类号] R284 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2017)07(a)-0016-04
[Abstract] Objective To research the method for purification technology of syringin in Cortex Ilicis Rotundae by D-900 resin. Methods The purification conditions of the resin were investigated by high performance liquid chromatography and ultraviolet spectrophotometry. The retention rate of syringin and the decolorization rate of the solution were investigated. Results The purification parameters of D-900 resin was as following： resin weight and sample volume ratio of 1∶5， resin column diameter and high ratio of 1∶5， adsorption velocity of 2 BV/h. The retention rate of syringin was above 80% and the decolorization rate of the solution was above 30% under these conditions. Conclusion The purification technology of syringin is simple and feasible.
[Key words] D-900 resin； Cortex Ilicis Rotundae； Syringin； Purification
救必應又名白木香、白皮冬青、熊胆木等，为冬青科植物铁冬青(Ilex rotunda Thunb.)的干燥树皮[1]，始载于《岭南采药录》，称“白木香、味苦、清热毒”，其味苦，性寒，归肺、胃、大肠、肝经，具有清热解毒、利湿止痛等功效，常用于咽喉肿痛、风湿痹痛、湿疹等，《中国药典》(2015年版一部)收载了该药材。据文献报道，救必应中所含主要化学成分为黄酮苷、酚类、三萜苷等，大多具有清热解毒、消肿止痛的功效[2]。现代药理学研究结果表明，紫丁香苷、长梗冬青苷以及其总黄酮类、总皂苷类成分为救必应主要有效成分，此类成分在心血管疾病、内分泌系统疾病、抗炎抗肿瘤、免疫调节等方面表现出了极强的生理活性[3-12]。并且紫丁香苷和长梗冬青苷在救必应中含量很高，其中紫丁香苷在药典中的含量限度是同为药典收载品种的刺五加紫丁香苷含量限度的20倍，具有开发中药一类新药的资源优势[13-19]。
本实验采用D-900阴离子交换树脂对救必应中紫丁香苷的纯化工艺进行研究，通过对救必应中紫丁香苷粗分离液色素的静态吸附、动态吸附性能等因素进行考察[20-29]，以确定树脂脱色的最佳工艺参数，为救必应中紫丁香苷纯化研究提供参考。
1 材料与设备
1.1 材料与试剂
救必应药材(产地广西，购自陕西铎耀中药饮片有限公司，经陕西中药研究所赵新礼研究员鉴定)经检验均符合《中国药典》(2015年版)有关规定；紫丁香苷对照品(批号：111574-200603，供含量测定用，中国食品药品检定研究院)；D-900型大孔吸附树脂(批号：20140410，陕西蓝深特种树脂有限公司提供)；乙腈(色谱纯，Fisher scientific)；甲醇(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)；水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
1.2 仪器与设备
Agilent 1260高效液相色谱仪(可变波长紫外检测器，美国安捷伦)；Cary50紫外分光光度计(美国瓦里安公司)；电子分析天平(AG-135、PB3002-S，梅特勒-托利多仪器有限公司)；KH3200SP超声波清洗机(昆山禾创超声仪器有限公司)；纯水器(美国Millipore)。
2 方法与结果
2.1 考察指标
2.1.1 紫丁香苷保留率 在相应的色谱条件下检测紫丁香苷含量，通过样品中紫丁香苷含量的变化考察树脂的吸附效果。紫丁香苷保留率=样品脱色后紫丁香苷含量/样品脱色前紫丁香苷含量×100%。
2.1.2 脱色率 将紫丁香苷粗分离液加水稀释25倍，在200～800 nm波长范围内对其进行光谱扫描，确定适合的检测波长，通过样品吸光度变化考察树脂的脱色效果[30]。脱色率=(样品脱色前溶液吸光度-样品脱色后溶液吸光度)/样品脱色前溶液吸光度×100%。
2.2 紫丁香苷含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm， 5 μm)；流动相：乙腈-水(1∶9)[31]；检测波长265 nm；理论塔板数按紫丁香苷峰计算应不低于5000。, http://www.100md.com(张俏 史文静 杜文娟)
[关键词] D-900阴离子交换树脂；救必应；紫丁香苷；纯化
[中图分类号] R284 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2017)07(a)-0016-04
[Abstract] Objective To research the method for purification technology of syringin in Cortex Ilicis Rotundae by D-900 resin. Methods The purification conditions of the resin were investigated by high performance liquid chromatography and ultraviolet spectrophotometry. The retention rate of syringin and the decolorization rate of the solution were investigated. Results The purification parameters of D-900 resin was as following： resin weight and sample volume ratio of 1∶5， resin column diameter and high ratio of 1∶5， adsorption velocity of 2 BV/h. The retention rate of syringin was above 80% and the decolorization rate of the solution was above 30% under these conditions. Conclusion The purification technology of syringin is simple and feasible.
[Key words] D-900 resin； Cortex Ilicis Rotundae； Syringin； Purification
救必應又名白木香、白皮冬青、熊胆木等，为冬青科植物铁冬青(Ilex rotunda Thunb.)的干燥树皮[1]，始载于《岭南采药录》，称“白木香、味苦、清热毒”，其味苦，性寒，归肺、胃、大肠、肝经，具有清热解毒、利湿止痛等功效，常用于咽喉肿痛、风湿痹痛、湿疹等，《中国药典》(2015年版一部)收载了该药材。据文献报道，救必应中所含主要化学成分为黄酮苷、酚类、三萜苷等，大多具有清热解毒、消肿止痛的功效[2]。现代药理学研究结果表明，紫丁香苷、长梗冬青苷以及其总黄酮类、总皂苷类成分为救必应主要有效成分，此类成分在心血管疾病、内分泌系统疾病、抗炎抗肿瘤、免疫调节等方面表现出了极强的生理活性[3-12]。并且紫丁香苷和长梗冬青苷在救必应中含量很高，其中紫丁香苷在药典中的含量限度是同为药典收载品种的刺五加紫丁香苷含量限度的20倍，具有开发中药一类新药的资源优势[13-19]。
本实验采用D-900阴离子交换树脂对救必应中紫丁香苷的纯化工艺进行研究，通过对救必应中紫丁香苷粗分离液色素的静态吸附、动态吸附性能等因素进行考察[20-29]，以确定树脂脱色的最佳工艺参数，为救必应中紫丁香苷纯化研究提供参考。
1 材料与设备
1.1 材料与试剂
救必应药材(产地广西，购自陕西铎耀中药饮片有限公司，经陕西中药研究所赵新礼研究员鉴定)经检验均符合《中国药典》(2015年版)有关规定；紫丁香苷对照品(批号：111574-200603，供含量测定用，中国食品药品检定研究院)；D-900型大孔吸附树脂(批号：20140410，陕西蓝深特种树脂有限公司提供)；乙腈(色谱纯，Fisher scientific)；甲醇(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)；水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
1.2 仪器与设备
Agilent 1260高效液相色谱仪(可变波长紫外检测器，美国安捷伦)；Cary50紫外分光光度计(美国瓦里安公司)；电子分析天平(AG-135、PB3002-S，梅特勒-托利多仪器有限公司)；KH3200SP超声波清洗机(昆山禾创超声仪器有限公司)；纯水器(美国Millipore)。
2 方法与结果
2.1 考察指标
2.1.1 紫丁香苷保留率 在相应的色谱条件下检测紫丁香苷含量，通过样品中紫丁香苷含量的变化考察树脂的吸附效果。紫丁香苷保留率=样品脱色后紫丁香苷含量/样品脱色前紫丁香苷含量×100%。
2.1.2 脱色率 将紫丁香苷粗分离液加水稀释25倍，在200～800 nm波长范围内对其进行光谱扫描，确定适合的检测波长，通过样品吸光度变化考察树脂的脱色效果[30]。脱色率=(样品脱色前溶液吸光度-样品脱色后溶液吸光度)/样品脱色前溶液吸光度×100%。
2.2 紫丁香苷含量测定
2.2.1 色谱条件 色谱柱：kromasil C18柱(150 mm×4.6 mm， 5 μm)；流动相：乙腈-水(1∶9)[31]；检测波长265 nm；理论塔板数按紫丁香苷峰计算应不低于5000。, http://www.100md.com(张俏 史文静 杜文娟)