[摘要] 目的 构建小鼠胆盐依赖脂肪酶(BSDL)重组蛋白的大肠埃希菌原核表达载体，制备具有生物学活性的小鼠BSDL蛋白。 方法 首先应用PCR合成mBSDL的cDNA序列，克隆至原核表达载体pET-28b，转化大肠埃希菌表达菌种BL21(DE3)感受态细胞，IPTG诱导重组蛋白表达。使用His Trap FF crude柱纯化重组mBSDL蛋白。Western blot鉴定后采用尿素浓度梯度降低法进行透析复性。 结果 成功构建原核表达载体pET-28b-mBSDL，实现该蛋白在E.coli BL21(DE3)表达菌种中的高效表达，并且表达蛋白主要存在于包涵体中。Western blot示获得较好的纯化效果且纯化后成功复性。 结论 成功构建mBSDL基因的原核表达质粒并制备具有活性功能的胆盐依赖脂肪酶 ......