1.5 Hoechst 33258检测细胞凋亡

    选取对数生长期的U2OS细胞接种于6孔板中，行细胞玻璃爬片实验，采用经CCK-8和流式检测作用较明显的5、10、20 μmol/L DAPT分别作用，含等体积DMSO的DMEM培养基作为对照组。收集作用48 h后的细胞，PBS洗2次，用4%的多聚甲醛室温固定20 min，PBS漂洗数次，Hoechst 33258常温避光染色10 min后置于倒置荧光显微镜下观察并拍照。

    1.6 RT-RCR分析天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶(Caspase)家族基因的表达

    选取对数生长期的U2OS细胞以1×105个/孔的密度种植于6孔板中，待细胞密度长至约70%时，加入含DAPT的新鲜培养液，使其终浓度分别为0、5、10、30 μmol/L，各组重复3次。药物处理48 h后去除培养液，Trizol提取RNA，以总RNA为模板，行逆转录，反应条件为70℃ 5 min，42℃ 1 h，95℃ 10 min。PCR反应条件为94℃ 5 min；94℃ 45 s ......