LOXP—DsRed—LOXP系统的构建及其应用(4)
2.7 小鼠活体成像检测Luciferase表达情况CL组模型鼠病毒注射后第3天检出16只小鼠荧光素酶阳性,第3周末8只小鼠荧光素酶阳性。L组模型鼠病毒注射后第3天检出17只小鼠荧光素酶阳性,第3周末检出8只小鼠荧光素酶阳性。见图7,封四。
3 讨论
在LOXP-DsRed-LOXP系统构建过程中,本研究优先选择DsRed荧光蛋白,相比于GFP,其红色荧光穿透力较强、持续时间长,且荧光强度比最好的绿色荧光蛋白GFP突变体更高[12],同时利用Cre/LOXP系统所具有的独特性质,构建出镶嵌有LOXP序列的DsRed基因[13]。在无Cre酶存在的情况下,DsRed基因可正常转录并在MCA38细胞内表达红色荧光蛋白,当Cre酶作用于LOXP序列后,DsRed基因即被灭活,导致红色荧光蛋白无法正常表达,随后通过倒置荧光显微镜观察MCA38LOXP-DsRed-LOXP细胞荧光情况即可快速判断Cre酶活性。由于MCA38LOXP-DsRed-LOXP细胞可长期培养 ......
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