TNF—α对成骨细胞程序性坏死的影响及相关机制的研究(2)
1 材料与方法1.1 主要材料与试剂
MTT(美国Sigma公司);RPMI-1640培养基(美国Gibco公司),胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司);Tunel试剂盒(江苏碧云天生物有限公司),兔抗鼠受体相互作用蛋白1(RIP1)、RIP3、混合谱系激酶结构区域样蛋白(MLKL)多克隆抗体、辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG(北京中杉金桥生物技术有限公司),Caspase 3多克隆抗体(proteintech有限公司),兔抗鼠β-actin单克隆抗体(美国Sigma公司)。
1.2 主要设备
培养箱(Thermo公司),二氧化碳孵箱(SANYO公司),倒置显微镜(Nikon公司),台式低温高速离心机(Beckman公司),-80℃冰箱(SANYO公司)。
1.3实验动物
出生2~3 d的清洁级SD小鼠乳鼠30只,购自上海斯莱克公司实验动物中心,实验动物合格证号(1131800667)。
1.4 实验方法
1.4.1 成骨细胞的分离培养及鉴定 成骨细胞采用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化方法的从乳鼠颅骨中提取 ......
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