孕期PM2.5暴露影响子代大脑发育中HMGB1/NF—κB通路的作用及机制研究(2)
1 材料与方法1.1 实验动物与模型制备
雌性昆明小鼠40只,6~8周龄,体重(34±2)g,购自青岛动物实验中心,生产许可证号:SCXK(鲁)20140001。按动物伦理学标准处理动物。室温25℃,自由饮水、进食。雌雄比2∶1合笼,次日查有阴栓者记为孕第1天。孕鼠随机分为空白组、对照组及PM2.5低、中、高剂量组,每组8只。空白组无处理;对照组注30 μL PBS;PM2.5低、中、高剂量组各注30 μL浓度为0.25920、1.56695、3.45600 μg/μL的PM2.5混悬液,采用气管滴注法孕期每3天(即孕第1、4、7、10、13、16、19天)滴注,共7次。
1.2 PM2.5的采集和處理
用采样器收集供暖季潍坊市大气细颗粒物。细颗粒物滤膜裁成小块浸入去离子水,低温超声振荡,收集滤液。颗粒物悬液冷冻真空干燥,-20℃保存[4]。根据实验用PBS稀释细粒子。
1.3 主要试剂与仪器
HMGB1单克隆抗体购自美国Abcom公司,NF-κB p65单克隆抗体购自美国CST公司 ......
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