CRISPR/cas9基因编辑系统的结构功能及其在脑胶质瘤中的应用进展(2)
3 CRISPR/Cas9系统作用机制CRISPR/Cas9作用机制可分为3个阶段：适应阶段、表达阶段和干扰阶段[8]。
适应阶段：当宿主菌受外源物质入侵后，外源质粒或噬菌体上的一小段DNA序列会以非同源重组的方式被整合到宿主菌的基因组中，整合的位置位于前导序列与第一个重复序列之间[9]，且每插入一段外源序列都会伴随着一次重复序列的复制，从而形成新的R-S结构。这一过程使得宿主CRISPR含有外源序列信息，为干扰阶段发挥作用提供基础。宿主对外源DNA序列的选择也并非随机的，有研究发现在前间区序列附近含有一些特定序列称为前间区序列邻近序列(protospacer adjacent motifs，PAMs)[10]，不同CRISPR亚型对于PAM的识别具有特异性。
表达阶段：CRISPR基因座首先被转录成一段长链的RNA，称为CRISPR RNA前体(Pre-crRNA)，同时Cas蛋白将形成一个具有内切酶功能的复合物，特异性地将crRNA切割加工成小的成熟crRNA。成熟的crRNA会与Cas蛋白复合物结合形成具有特殊功能的Cas/crRNA作用复合体，在干扰阶段发挥作用[9]。
干扰阶段：当宿主再次接触到外界噬菌体或质粒时，crRNA便会与其同源的外源核酸特异性结合，而后通过Cas/crRNA作用复合体将外源核酸切割成碎片 ......
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