实验红鲫C1HD系SNP标记的研究(3)
关于SNPs检测的方法很多,如单链构象多态性(SSCP)、变性梯度凝胶电泳(DDGE)、酶切扩增多态性序列(CAPS)、等位基因特异性PCR(AS-PCR)等[23]。SB-ASA方法是姜正文等[11]在基于等位基因专一性PCR原理上发展起来的一种新的SNP分型方法,其原理是一个PCR反应体系包含两个3′末端分别与SNP两个等位基因特异结合的引物,它们延伸方向相反,产生长度不同的等位基因专一性扩增产物,同时在两个等位基因特异性引物的3′端第3位碱基引入不配对能够增加特异性。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后分析确定样本的基因型。这种方法后来应用在近交系小鼠和近交系大鼠的遗传检测上[12-15],效果很好,可有效地鉴别近交系品系。本文也进一步证实SB-ASA方法是一项开展SNPs分型的有效的方法。该方法操作简便、快速,可同时测定三种SNPs等位基因类型,易于推广。值得注意的是,用SB-ASA方法进行PCR反应时,必须保证扩增全长片段的引物(内参引物)的变性温度Tm值和SNP位点特异性引物Tm值相差在3℃以内 ......
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