1.2 方法

    1.2.1 人外周血PBMC的分离 以密度梯度离心法分离人外周血PBMC。将淋巴细胞分离液和抗凝血按照1：1的比例先后加入离心管，保持界面清晰。2000 r/min离心20 min。小心吸取血浆和淋巴细胞分离液界面处单个核细胞形成的云雾层。PBS洗涤3遍，台盼兰染色计数，细胞活力﹥95%。

    1.2.2 小鼠脾细胞的分离 颈椎脱位法处死小鼠，无菌条件下取脾脏，置于盛有RPMI-1640培养液的平皿中。用眼科剪将脾脏剪成小段，置于200目不锈钢筛网上，用注射器针芯轻压使细胞通过制成脾细胞悬液，200目尼龙网过滤。台盼兰染色，细胞活力﹥95%。

    1.2.3 实验设计 采用正交实验设计方法(表1)。各因素分别为：A-初始细胞浓度(×106/mL)；B-培养时间(h)；C-LPS浓度(μg/mL)，D-加入CCK-8后的显色时间(h)。其中A因素有4个水平，B、C、D因素各有3个水平。用SPSS 20.0设计L16(41×33)混合正交表(表2～3)，观察指标为刺激指数(SI)。按照表2的试验安排筛选CCK-8检测人PBMC增殖试验最佳条件；按照表3筛选CCK-8检测小鼠脾淋巴细胞增殖试验的最佳条件 ......