1.2 方法[14]

    1.2.1 MIC值检测 取MH琼脂平皿上过夜生长的单菌落，接种于LB肉汤培养基中，稀释，加入含有LB肉汤和左氧氟沙星的试管中，读取MIC，采用肉汤稀释法检测左氧氟沙星的MIC值。

    1.2.2 三氯生诱导外排泵后左氧氟沙星MIC值检测 三氯生诱导外排泵后左氧氟沙星的MIC值同上法。取于LB肉汤中过夜增殖的菌液100 μL，倾倒于含有64 μg/mL三氯生的MH琼脂平皿上，35℃过夜孵育，挑取菌落接种于LB肉汤培养基中，读取MIC。

    1.2.3 检测诱导前后smeD的表达 选取泵抑制剂阳性的菌株进行以下3组实验：第1组在LB肉汤中，35℃孵育；第2组LB肉汤中加入64 μg/mL三氯生后35℃孵育；第3组在对数生长期时向菌液中加入同样浓度的三氯生继续培养1 h，35℃孵育；3组均培养20 h。提取细菌总RNA，定量后取兩个稀释度(0.5、0.05 μg/μL)的RNA溶液进行RT-PCR，扩增smeD基因5′端的395 bp片段。

    反应上游：D1 5′-CATGTTGCTGAGCCGAATCC-3′；反应下游：D2 5′-CAAGAGCCTTTCCGTCAT-3′ ......