VASP基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建与鉴定

VASP基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建与鉴定(2)

http://www.100md.com 2018年9月5日《中国医药导报》 2018年第25期

     1 材料与方法

    1.1 主要材料

    H-DMEM培养基购自Hyclone公司；胎牛血清购自杭州四季青公司；左旋谷氨酰胺、LipofectamineTM2000、BP ClonaseTM Ⅱ Enzyme Mix、LR ClonaseTM Ⅱ Enzyme、蛋白酶K、Opti-MEM培养基、pcDNA6.2-GW/EmGFP载体、pDONRTM221载体、pLenti6/V5-DEST载体、慢病毒包装混合物(Packing Mix Lentiviral)、239FT细胞株、感受态均购自lnvitrogen公司；质粒小提试剂盒购自北京天根公司；1 kb DNA Ladder购自Fermentas公司；Eag Ⅰ购自NEB公司；质粒大提试剂盒购自Axygen公司。BGC-823胃癌细胞株购自武汉大学保藏中心。靶向VASP基因的小干扰RNA真核表达载体pcDNA6.2-miRVASP由本实验室构建保存。

    1.2 方法

    1.2.1 慢病毒入门载体pDONRTM221-miRVASP载体的构建 PcDNA6.2-GW/EmGFP-miR载体携带有attB位点 ......

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