1.2.6 Western blot法检测各组肝组织中SIRT1、GLUT4及NF-κB蛋白表达水平 将提取的肝组织置于缓冲液(RIPA∶PMSF=500∶1)中，于玻璃匀浆器中制成匀浆，冰上孵育，超声处理，离心，提取组织蛋白。将样本定量于20 μL，凝胶电泳90 min，然后转膜90 min。转膜后，用5%的低脂蛋白封闭液封闭1 h，用5%BSA-TBST稀释鼠单克隆抗体SIRT1(1∶1000)，4℃水平摇床孵育过夜。次日洗膜，TBST洗3次，每次10 min。用5%BSA-TBST稀释二抗山羊抗鼠IgG(H+L)HRP(1：10 000)，室温孵育40 min。洗膜：TBST洗膜3次，每次10 min。ECL滴加到膜的蛋白面，反应3 min，胶片曝光。图片扫描后，使用软件Gel Image system ver. 4.00对图像进行灰度分析。采用β-actin作为内参对照，同样的方法测定NF-κB和GLUT4的蛋白水平。实验重复3次。

    1.3 统计学方法

    用SPSS 18.0统计学软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验 ......